ОЦЕНКА  МИКРОБИОЦЕНОЗА  ПРИ  ПРОМЫШЛЕННОМ  ВОСПРОИЗВОДСТВЕ  РЫБ

Байкенова  Айымжан  Ислямовна

младший  научный  сотрудник  научно-исследовательской  лаборатории  биотехнологии  и  экспериментальной  биологии  ТОО  «БиоПромСервис»  РК  г.  Астана

E-mail:  b.aiymjan@mail.ru

Браздылова  Нина  Сергеевна

старший  научный  сотрудник  лаборатории  аквакультуры  ТОО  «Казахский  НИИ  рыбного  хозяйства»  РК  г.  Алмата

Садыков  Азамат  Мухамедьярович

заведующий  научно-исследовательской  лабораторией  биотехнологии  и  экспериментальной  биологии

E-mail:  aza_sadykov@mail.ru

Балтабеков  Арман  Аллажарович

старший  научный  сотрудник  научно-исследовательской  лаборатории  биотехнологии  и  экспериментальной  биологии

ТОО  «БиоПромСервис»  РК  г.  Астана

E-mail:  arman_82.03@mail.ru

Койшыбаева  Сая  Кашкинбаевна

заведующая  лабораторией  аквакультуры  ТОО  «Казахский  НИИ  рыбного  хозяйства»  РК  г.  Алмата

E-mail:  saya.kk@mail.ru

ASSESSMENT  IN  THE  INDUSTRIAL  MICROBIOCENOSIS  FISH  REPRODUKION

Baikenova  Aiymzhan

junior  Researcher,  Research  Laboratory  of  Experimental  Biology  and  Biotechnology,  Kazakhstan,  Astana  LLP  "BioPromServis",

Brazdylova  Nina  Sergeevna

senior  Researcher,  Laboratory  of  Aquaculture  Kazakhstan  Almaty  LLP  "Kazakh  Research  Institute  of  Fisheries"

Sadykov  Azamat  Muhamedyarovich

head  of  the  Research  Laboratory  of  Experimental  Biology  and  Biotechnology

Kazakhstan,  Astana  LLP  "BioPromServis"

Baltabekov  Arman  Allazharovich

senior  researcher  at  the  Research  Laboratory  of  Experimental  Biology  and  Biotechnology,  Kazakhstan,  Astana  LLP  "BioPromServis"

Koyshibaeva  Saya

head  of  Laboratory  of  Aquaculture,  Almaty

АННОТАЦИЯ

В  современным  состоянием  экосистемы  Казахстанской  аквакультуры  и  присутствием  в  ней  растворенных  и  взвешенных  органических  веществ  природного  и  антропогенного  происхождения,  особую  актуальность  приобретают  исследования  по  оценке  эколого-микробиологического  риска  для  воспроизводства  рыбных  ресурсов  [6,  с.  216]. 

Учитывая  слабую  изученность  микрофлоры  рыб  и  воды  в  хозяйствах,  подобные  исследования  водоемов  представляют  научный  и  практический  интерес  в  экологии  и  микробиологии,  но  и  в  других  областях  естественных  наук  [7,  с.  469;  4,  c.  489].

ABSTRACT

Due  to  the  current  state  of  the  ecosystem  Kazakhstan  aquaculture  and  the  presence  of  dissolved  and  suspended  organic  substances  of  natural  and  anthropogenic,  enhanced  the  importance  of  research  on  the  environmental  and  microbiological  risk  to  the  reproduction  of  fish  resources  [6,  р.  216].

Given  the  insufficient  study  of  microflora  of  fish  and  water  in  the  farms,  such  studies  even  one  of  these  reservoirs  are  of  scientific  and  practical  interest  in  ecology  and  microbiology  [7,  р.  469;  4,  р.  489].

Ключевые  слова:  аквакультура;  рыбные  ресурсы;,  микробиологические  исследования;  микрофлора  рыб  и  воды.

Key  say:  аquaculture;  fish  resources;  microbiological  researches;  microflorae  of  fishes  and  water.

Актуальность

Каждый  водоем  в  естественном  состоянии  заселен  микроорганизмами,  занимающими  различные  экологические  ниши.  Среди  основных  групп  бактерий  выделяются  гетеротрофные,  которые  участвуют  в  самоочищении  водных  экосистем,  потребляя  органические  вещества  [1,  с.  217].  Загрязнение  водоема  оказывает  непосредственное  влияние  на  аборигенную  водную  микрофлору  и  микробиоценоз  рыб,  изменяя  их  количественное  и  качественное  соотношение.  В  этих  условиях  бактериальные  показатели  приобретают  неоценимое  индикаторное  значение,  позволяя  выявить  различные  источники  и  виды  антропогенного  воздействия  [7,  с.  16;  4,  с.  467]. 

Техногенное  и  антропогенное  воздействие  на  биосферу  вызывает  сложные  процессы,  ведущие  к  деградации  экосистем,  среди  которых  особое  значение  имеет  нарушение  эволюционно  сложившихся  микробиоценозов  воды,  почвы  и  других  компонентов  окружающей  среды.  Поэтому  загрязнение  водоемов,  в  том  числе  микробное,  несет  в  себе  угрозу  распространения  заболеваний  и  снижения  эффективности  воспроизводства  коммерческого  поголовья  рыб  [2,  с.  284]. 

Заболевания  рыб  могут  наносить  большой  ущерб  рыбоводству,  поэтому  для  успешного  разведения  рыбы,  получения  высокой  продуктивности  важно  знать  принципы  создания  благоприятных  условий  для  роста  и  развития  [5,  с.  225;  8,  с.  15]. 

Рыбы  заболевают  в  результате  нарушения  условий  содержания  и  кормления,  а  также  при  попадании  паразитарных  организмов,  поэтому  при  выращивании  осетровых  рыб  необходимо  строгое  выполнение  комплекса  ветеринарных  и  рыбоводных  мероприятии,  обеспечивающих  надлежащую  санитарную  культуру  и  сохранение  выращиваемой  рыбы  [9,  с.  467;  10,  с.  97].

В  индустриальном  рыбоводстве,  направленном  на  достижение  максимального  роста  рыбы  за  минимальный  промежуток  времени,  применяются  высокопитательные  корма,  что,  при  ухудшении  условий  содержания,  создает  благоприятные  условья  для  развития  условно-  патогенной  микрофлоры.  Применяемые  при  этом  химические  препараты,  особенно  антибиотики,  приводят  к  микробиологической  стерилизации  организма  рыбы,  снижению  общей  резистентности  и,  как  следствие,  возникновению  неспецифичных  инфекционных  заболеваний  [9,  с.  7]. 

  Возбудителями  ряда  инфекционных  болезней  рыб  являются  условно-патогенные  микробы,  которые  в  качестве  нормальной  флоры  заселяют  кожные  покровы  тела  и  слизистые  оболочки.  К  ним,  в  частности,  относятся  бактерии  рода  Aeromonas,  Pseudomonas,  Streptocоccus,  представители  семейства  Enterobacteriacea  и  т.  д.  Слизистые  оболочки  относятся  к  естественным  защитным  барьерам,  но  при  неблагоприятных  условиях  содержания  рыб  нарушается  проницаемость  слизистой  кишечника  и  населяющие  ее  бактерии  проникают  во  внутренние  органы,  начинают  активно  размножаться,  вызывая  всевозможные  негативные  явления,  как  во  внутренних  органах,  так  и  в  самом  кишечнике  [11,  с.  41]. 

Влияние  этих  факторов  усугубляется  весьма  значимой  зависимостью  рыб  от  качества  среды  обитания.  Отрицательное  воздействие  вынуждает  организм  рыб  направлять  часть  своих  сил  на  адаптацию  к  подобным  условиям,  что  приводит  к  усилению  напряженности  иммунитета,  ухудшению  здоровья,  снижению  темпа  роста  и  выживаемости  [12,  с.  115].

В  этой  связи  актуальное  значение  имеет  оценка  микробиологического  состава  окружающей  среды  воспроизводимых  рыб  и  их  слизистых  оболочек,  которые  являются  основным  барьером  инвазии  инфекции.  В  данной  статье  описаны  качественные  и  количественные  характеристики  патогенной  и  условно  патогенной  микрофлоры  внешних  покровов  и  мест  обитания  рыб  [13,  с.  28].

Материалы  и  методы

Чилик  —  пруды,  разновозрастная,  старшая  группа  (от  2  до  6  лет),  весовой  предел:  от  9—115  гр.,  рост:  от  9,3—19,7  см.,  вид  исследуемых  рыб:  русский  осетр,  сибирский  осетр,  судак.

Капчагай  —  бассейны,  одомашненные  формы,  весовой  предел:  от  64—93,7  гр.,  рост:  от  25,6—30,6  см.,  вид  исследуемых  рыб:  стерляди  (сеголетки),  РОЛО  (русский  осетр  +  гибрид  Ленский  осетр).

В  ходе  работы  был  проведен  отбор  проб  из  водных  резервуаров  и  водоемов  при  различных  способах  содержания  рыб,  взяты  клинические  пробы  с  поверхности  жаберных  крышек,  ротовой  полости  и  анального  отверстия  у  рыб  семейства  осетровых.

Из  различных  субстратов  отбирали  по  1  мл  (г)  образца,  после  чего  их  помещали  в  пробирки  с  9  мл  изотонического  раствора  NaCl,  перемешивали  и  оставляли  на  10—15  мин  при  комнатной  температуре.  Затем  делали  разведения,  для  чего  в  9  последующих  пробирок  для  каждого  источника  с  9  мл  изотонического  раствора  NaCl  вносили  по  1  мл  из  предыдущей  пробирки,  получая,  таким  образом,  во  2  пробирке  разведение  в  10^-2  степени,  в  3  пробирке  —  10^-3  и  так  далее  до  получения  разведения  в  10^-6  степени.  После  разведения  проб  проводили  посев  1  капли  суспензии  на  элективные  и  дифференциальные  среды  параллельно  на  2  чашки  Петри.  После  инкубации  при  температуре  37°С  в  течение  48  ч,  подсчитывали  среднее  число  колоний  с  обеих  чашек. 

Для  выявления  различных  групп  микроорганизмов  весь  материал  высевали  на  дифференцированные  питательные  среды.  Культивировали  культуры  в  течение  16,  24  и  36  часов  в  термостате  при  30^ºС,  37^ºС  и  42^ºС.  В  исследованиях  использовали  хромогенные  среды  с  красителями,  для  более  точной  идентификаций  культур  использовали  среды  Эндо,  Левина,  МПА,  МРС,  среду  с  азидом  Na  и  т.  д.

По  результатам  культуральной  характеристики  отдельные  изоляты  бактерий  были  сгруппированы,  так  как  обладали  некоторой  схожестью  формы,  размера  и  цвета  колоний.  Далее  была  проведена  микроскопия  полученных  изолятов  [14,  с.  567—575].

Из  прудов  выращиваемых  рыб,  проводили  отбор  проб  воды  для  исследования  микробиоценоза.  Количественный  посев  воды  делали  на  плотные  питательные  среды:  эритрит-агар  —  для  определения  общего  микробного  числа  (ОМЧ)  и  среду  Эндо  —  для  выделения  и  определения  энтеробактерий,  аэромонад  и  НФЩ.  Метод  для  определения  общего  числа  микроорганизмов  воде  основан,  на  посеве  не  менее  двух  объемов  по  1  мл  из  каждой  пробы,  культивировании  посевов  и  последующим  подсчете  выросших  колонии.  После  тщательного  перемешивания  пробы  воды  в  стерильные  чашки  Петри  под  приоткрытую  крышку  вносили  по  1  мл.  После  внесения  воды  в  каждую  чашку  (диаметром  90—100)  наливали  8—12  мл  расплавленного  и  остуженного  до  45—49°С  питательного  агара.  После  застывания  агар  чашки  с  посевами  помещали  в  термостат  вверх  дном  и  инкубировали  при  37  (+/–1)  °С  в  течение  24(+/–2)  часов.

При  учете  результатов  подсчитывали  все  выросшие  на  чашки  колонии,  наблюдаемые  при  увеличении  в  2  раза.  Учитывали  только  те  чашки,  на  которых  выросло  не  более  300  изолированных  колоний.  Количество  колоний  на  обеих  чашках  суммировали  и  делили  на  два.  Результат  выражали  числом  КОЕ  в  1  мл  исследуемой  пробы.

Для  более  точной  идентификации  проводили  малый  ряд  биохимического  анализа,  где  была  проведена  оценка  образования  сероводорода,  выделение  газа,  ферментация  глюкозы  до  кислоты.  Феноменом  образования  сероводорода  являлось  потемнение  среды  до  темно-черного  цвета.  Пузыри  служили  знаком  образованием  газа.  Определением  ферментации  глюкозы  до  кислоты  служило  изменение  цвета  среды  от  светло-розового  до  темно-малинового  цвета.

Результаты

В  результате  проведенных  работ  в  основном  исследуемые  культуры  были  представлены  Грамм  положительными  палочками,  кокками,  различающимися  по  длине,  толщине  и  характеру  расположения  (Рисунок  1).

                                      а)                                  б)

                             в)                                           г)

Рисунок  1.  Микроскопия  полученных  изолятов

Выделенные  изоляты  отличались  различной  ферментативной  активностью  (рисунок  2). 

Рисунок  2.  Первичная  идентификация  выделенных  изолятов

Как  мы  видем  из  рисунка  2,  представители  рода  Enterobacteriaceae  могут  ферментировать  глюкозу  до  кислоты,  не  кислотоустойчивы,  образуют  газ,  а  представители  рода  Escherichia  образуют  желтый  косяк  и  желтый  столбик,  а  так  же  образует  газ. 

Характеристика  уровня  бактериальной  обсемененности  (ОМЧ)  и  микробиоценоз  воды  приведены  в  таблице  1.

Таблица  1.

Исходные  показатели  ОМЧ  и  микробиоценоз  воды  рыбоводных  прудов

В  ходе  исследований  установлено,  что  качественный  состав  микробиоценоза  поверхности  рыб  представлен  7  семействами  (Pseudomonadaceae,  Enterobacteriaceae,  Micrococcaceae,  Listeriaceae,  Vibrionaceae,  Bacillaceae,  Neisseriaceae),  4  родами  (Pseudomonas,  Micrococcus,  Bacillus,  Listeria)  (рисунок  3).

Микробный  пейзаж  воды  и  рыб  был  представлен  микроорганизмами  следующих  таксонов:  Pseudomonas  —  10  %,  семейство  Enterobacteriacea  (Citrobacter  —  27  %,  E.Coli  —  1  %),  кокковые  формы  —  10  %,  Bacillus  —  10  %,  грибы  —  9  %.

Рисунок    3.  Микробный  пейзаж  воды  и  рыб

Во  все  периоды  отбора  проб  преобладали  представители  семейства  рода  Pseudomonas.  Максимальный  коэффициент  Симпсона  (С),  который  составляет  от  0,25  до  1  (таблица  2).

Таблица  2.

Показатель  бактериальных  таксонов  по  «коэффициенту  Симпсона»  (C)  из  2-х  мест  отбора  проб  (А-анальное,  Ж-жаберное,  С-слизистое)