МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ  ИЗМЕНЕНИЯ  ЖЕЛТОГО  ТЕЛА  В  ЯИЧНИКАХ  БЕЛЫХ  КРЫС  ПРИ  ВОЗДЕЙСТВИИ  АЦЕТАТА  СВИНЦА

Дуденкова  Наталья  Анатолиевна

аспирант  кафедры  биологии,  географии  и  методик  обучения  3  курса  очной  формы  обучения  специальности  03.03.04  —  Клеточная  биология,  цитология,  гистология,  ФГБОУ  ВПО  «Мордовский  государственный  педагогический  институт  имени  М.Е.  Евсевьева»,  РФ,  г.  Саранск

E-mail:  dudenkova_nataly@mail.ru

Шубина  Ольга  Сергеевна

д-р  биол.  наук,  профессор,  зав.  кафедрой  биологии,  географии  и  методик  обучения  ФГБОУ  ВПО  «Мордовский  государственный  педагогический  институт  имени  М.Е.  Евсевьева»,  РФ,  г.  Саранск

E-mail: 

MORPHOLOGICAL  AND  FUNCTIONAL  CHANGES  OF  YELLOW  BODY  IN  THE  OVARIES  OF    RATS  UNDER  THE  INFLUENCE  OF  LEAD  ACETATE

Dudenkova  Natalia  Anatolievna

postgraduate  student  Department  of  biology,  geography  and  methods  of  teaching  3  the  course  of  internal  form  of  training  speciality  03.03.04  –  Cell  biology,  cytology,  histology,  Federal  State  Budgetary  Educational  Institution  of  Higher  Professional  Education  «Mordovian  State  Pedagogical  Institute  named  after  M.E.  Evsevjev»,  Russia  Saransk

Shubina  Olga  Sergeevna

doctor  of  biological  Sciences,  Professor,  head  of  the  Department  of  biology,  geography  and  methods  of  teaching  Federal  State  Budgetary  Educational  Institution  of  Higher  Professional  Education  «Mordovian  State  Pedagogical  Institute  named  after  M.E.  Evsevjev»,  Saransk

Работа  проводилась  при  поддержке  Минобрнауки  РФ  в  рамках  Программы  стратегического  развития  «Педагогические  кадры  для  инновационной  России»  (госзадание  №  2  от  16.03.  2013  г.).

АННОТАЦИЯ

С  помощью  гистологических,  морфометрических  и  статистических  методов  исследования  изучали  влияние  ацетата  свинца  на  желтое  тело  в  яичниках  половозрелых  самок  белых  крыс.  Накопление  свинца  в  организме  экспериментальных  животных  в  течение  одного  полового  цикла  проявлялось  в  уменьшении  количества  менструальных  желтых  тел  в  яичнике,  а  также  составляющих  их  лютеиновых  клеток.

ABSTRACT

Using  histology,  morphometric  and  statistical  methods  to  study  examined  the  impact  of  lead  acetate  in  the  corpus  luteum  in  the  ovary  Mature  females    rats.  Lead  accumulation  in  the  organism  of  experimental  animals  in  the  course  of  one  sexual  cycle  manifested  in  the  decrease  in  the  number  of  menstrual  yellow  bodies  in  the  ovary  and  also  their  contents  лютеиновых  cells.

Ключевые  слова:  яичники;  менструальное  желтое  тело;  лютеиновые  клетки  (лютеоциты);  ацетат  свинца.

Keywords:  ovaries;  menstrual  yellow  body;  luteal  cells  (lyuteotsity);  lead  acetate.

Введение.

Ухудшающаяся  экологическая  ситуация  в  настоящее  время  является  одним  из  главных  факторов  нарушения  женской  репродуктивной  функции  [1,  с.  28],  что  влияет  на  течение  беременности  и  развитие  плода  [5,  с.  36;  6,  с.  5;  8,  с.  22].  Среди  наиболее  опасного  антропогенного  загрязнения  окружающей  среды,  лидирующие  позиции  занимает  свинец  и  его  соединения  [1,  с.  26;  3,  с.  29].  Во  многих  исследованиях  выяснено,  что  при  воздействии  ацетата  свинца  изменяется  морфологическая  структура  яичников  белых  крыс  [7,  с.  313].  Однако  практически  отсутствуют  данные  о  влиянии  ацетата  свинца  на  менструальное  желтое  тело  в  яичниках,  роль  которого  очень  важна  для  успешной  имплантации  оплодотворенной  яйцеклетки  в  матке  и  нормального  течения  беременности. 

Целью  нашего  исследования  явилось  изучение  морфологических  и  морфометрических  показателей  менструального  желтого  тела  в  яичниках  самок  белых  крыс  при  воздействии  ацетата  свинца.

Материал  и  методы  исследования.

В  качестве  биологического  тест-объекта  в  работе  использовали  белых  беспородных  половозрелых  крыс-самок  в  возрасте  18—20  месяцев,  имеющих  стабильный  эстральный  цикл,  массой  200—250  г.  в  летнее  время  года.  Всего  использовано  50  животных.

В  соответствии  с  поставленными  задачами  животные  разбивались  на  две  группы.  Контрольную  группу  составили  20  самок,  содержащихся  на  общем  режиме  вивария.  Опытную  группу  составили  30  самок,  получавших  в  течение  7  дней  перорально  ацетат  свинца  Pb(CH₃COO)₂3H₂O  в  дозе  45  мг/кг/сутки.

Животные  забивались  путем  декапитации  под  наркозом  эфира  с  хлороформом  (1:1)  с  соблюдением  принципов  гуманности,  изложенных  в  директивах  Европейского  сообщества  (86/609/ЕЕС)  и  Хельсинкской  декларации,  и  в  соответствии  с  требованиями  правил  проведения  работ  с  использованием  экспериментальных  животных.  Для  более  точного  исследования  яичников  самок  белых  крыс  забивали  в  стадию  диэструса,  которая  характеризуется  как  период  функционирования  желтого  тела.

Фаза  диэструса  определялась  путем  анализа  влагалищных  мазков  при  осмотре  под  цифровым  микроскопом  Axio  Imager.M2  (ZEISS,  Япония)  при  увеличении  100´10.  В  фазу  диэструса  в  мазке  содержались  в  основном  лейкоцитарные  клетки  (≥60  %)  и  редкие  эпителиальные  клетки  [2,  с.  1026].

Животных  забивали  декапитацией  под  наркозом  эфира  с  хлороформом  (1:1)  с  соблюдением  принципов  гуманности,  изложенных  в  директивах  Европейского  сообщества  (86/609/ЕЕС)  и  Хельсинкской  декларации,  и  в  соответствии  с  требованиями  правил  проведения  работ  с  использованием  экспериментальных  животных.

Яичники  самок  различных  групп  подвергались  гистологическому  исследованию.  Образцы  тканей  фиксировали  в  10  %-ном  растворе  нейтрального  формалина.  Зафиксированные  образцы  после  промывки  в  проточной  воде  подвергали  обезвоживанию  путем  помещения  исследуемого  материала  в  спирты  возрастающей  концентрации  и  заливали  в  парафин  по  общепринятой  методике.  Готовили  гистологические  срезы  яичников  толщиной  10—15  мкм,  окрашивали  их  гематоксилин-эозином  и  исследовали  с  помощью  цифрового  микроскопа  Axio  Imager.M2  (ZEISS,  Япония)  с  программным  обеспечением  для  анализа  изображений  AxioVision  SE64  Rel.  4.8.3  и  ZEN  2011.  Фотосъемку  препаратов  производили  цифровой  камерой  AxioCam  MRc5  (ZEISS,  Япония)  с  последующей  обработкой  изображения  в  Abode  Photoshop  Elements  11.

При  обзорной  микроскопии  проводили  морфологический  анализ  желтого  тела  менструации  в  яичниках,  после  чего  изучали  морфометрические  параметры:  количество  желтых  тел  в  яичнике,  их  площадь,  а  также  количество  и  площадь  составляющих  их  лютеиновых  клеток,  и  площадь  их  ядер.

Морфометрические  измерения  производили  при  увеличении  20×10,  40×10  и  100×10.  Разрешение  полученных  изображений  —  1300×1030  пикселей.

Статистическая  обработка  цифровых  данных  проводилась  с  помощью  программ  FStat  и  Excel.  Проверка  статистических  гипотез  осуществлялась  по  t-критерию  Стьюдента.  При  оценке  статистических  гипотез  принимались  следующие  уровни  значимости:  p≤0,05.  Математическая  обработка  результатов  морфометрических  исследований  проводилась  с  использованием  метода  корреляционного  анализа.

Результаты  исследования  и  их  обсуждение.

После  проведенных  исследований  выявлено,  что  в  контроле  в  корковом  веществе  яичника  желтые  тела  располагаются  равномерно,  покрыты  соединительнотканной  капсулой,  от  которой  к  центру  направляются  тонкие  прослойки,  содержащие  кровеносные  и  лимфатические  сосуды.  Обнаруженные  желтые  тела  имеют  округлую  или  овальную  форму.  Большинство  из  них  находятся  в  стадии  образования  или  зрелости  (рис.  1,  2).

При  исследовании  лютеиновых  клеток,  составляющих  основу  желтого  тела,  обнаружено,  что  они  располагаются  плотно  друг  к  другу  и  имеют  неправильную  многогранную  форму.  Клеточный  состав  в  различных  участках  менструального  желтого  тела  неодинаков.  По  периферии  преобладают  мелкие  лютеоциты,  а  ближе  к  центру  —  крупные.  Ядра  лютеиновых  клеток  относительно  крупные,  темные  вследствие  равномерного  распределения  гранул  хроматина,  и  располагаются,  как  правило,  в  центре  клетки  (рис.  3).

Рисунок  1.  Менструальное  жёлтое  тело  в  яичнике  (контроль).  Окраска  гематоксилин-эозин.  Ув.  20×10

Рисунок  2.  Менструальное  жёлтое  тело  в  яичнике  (контроль).    Четко  видно  скопление  кровеносных  сосудов  в  центре  желтого  тела.  Окраска  гематоксилин-эозин.  Ув.  40×10

Рисунок  3.  Лютеиновые  клетки  желтого  тела  (контроль).  Окраска  гематоксилин-эозин.  Ув.  100×10.

После  7  дней  перорального  введения  ацетата  свинца  отмечено  уменьшение  количества  менструальных  желтых  тел  в  яичниках  самок  белых  крыс  по  сравнению  с  контролем,  что  свидетельствует  об  уменьшении  количества  созревших  и  вышедших  из  яичника  яйцеклеток.

Обнаруженные  желтые  тела  имеют  неправильную  форму.  Большинство  из  них  находятся  в  стадии  инволюции  или  на  начальном  этапе  образования. 

Сосуды  менструального  желтого  тела,  по  сравнению  с  контролем,  находятся  в  разном  морфофункциональном  состоянии.  В  одних  участках  желтого  тела  капилляры  расширены  и  кровенаполнены,  а  в  других  —  разрушены  (рис.  4,  5).

Рисунок  4.  Менструальное  жёлтое  тело  в  яичнике  (опыт).  Окраска  гематоксилин-эозин.  Ув.  20×10

Рисунок  5.  Менструальное  жёлтое  тело  в  яичнике  (опыт).    Четко  видно  рассредоточение  мелких  кровеносных  сосудов  по  всему  контуру  желтого  тела.  Окраска  гематоксилин-эозин.  Ув.  40×10.

Также  выявлено,  что  при  воздействии  ацетата  свинца,  по  сравнению  с  контролем,  лютеиновые  клетки  располагаются  более  свободно,  уменьшены  в  размерах,  имеют  округлую  или  овальную  форму  и  концентрируются  преимущественно  вокруг  кровеносных  сосудов.  Ядра  лютеоцитов  смещаются,  как  правило,  к  одному  из  полюсов  клетки,  более  светлые,  по  сравнению  с  контролем,  вследствие  расположения  хроматина  по  краям  в  виде  глыбок  (рис.  6).

Рисунок  6.  Лютеиновые  клетки  желтого  тела  (опыт).  Окраска  гематоксилин-эозин.  Ув.  100×10

Морфометрические  исследования  показали,  что  в  опытной  группе  животных,  по  сравнению  с  контролем,  происходит  уменьшение  количества  менструальных  желтых  тел  в  яичнике  и  их  площади  соответственно  на  45,30  %  (P≤0,05),  30,23  %  (P≤0,001).  Уменьшается  количество  лютеиновых  клеток,  составляющих  желтое  тело,  площадь  лютеиновых  клеток  и  площадь  их  ядер  соответственно  на  22,58  %  (P≤0,05),  26,19  %  (P≤0,001),  33,54  %  (P≤0,001)  (табл.  1).

Таблица  1.

Морфометрические  показатели  менструальных  желтых  тел  в  яичниках  самок  белых  крыс

Примечание:  *  —  P≤0,05  по  сравнению  с  контрольными  животными;

**  —  P≤0,001  по  сравнению  с  контрольными  животными

Выводы.

Ацетат  свинца  приводит  к  следующим  морфологическим  и  морфометрическим  изменениям  менструального  желтого  тела  в  яичниках  самок  белых  крыс:

1.  изменению  формы  желтых  тел  от  округлой  или  овальной  до  неправильной;

2.  уменьшению  количества  желтых  тел  в  яичнике,  а  также  составляющих  их  лютеиновых  клеток;

3.  уменьшению  площади  желтых  тел,  площади  лютеиновых  клеток  и  их  ядер;

4.  дезорганизация  кровоснабжения  в  желтом  теле.

Список  литературы:

1.            Измеров  Н.Ф.  Свинец  и  здоровье.  Гигиенический  и  медико-биологический  мониторинг.  М.:  Медицина,  2000.  —  256  с.

2.            Клочков  Д.В.,  Алехина  Т.А.  Селекция  на  усиление  кататонической  реактивности  крыс,  половая  функция  и  синхронизация  эстральной  цикличности  //  Вавиловский  журнал  генетики  и  селекции.  —  2012.  —  №  16.  —  С.  1025—1031.

3.            Корбакова  А.И.  Свинец  и  его  действия  на  организм  (обзор  литературы)  //  Медицина  труда  и  промышленная  экология.  —  2001.  —  №  5.  —  С.  29—34.

4.            Паранько  Н.М.  Роль  тяжелых  металлов  в  возникновении  репродуктивных  нарушений  //  Гигиена  и  санитария.  —  2002.  —  №  1.  —  С.  28—30.

5.            Савельева  Г.В.  Плацентарная  недостаточность.  М.:  Медицина,  1991.  —  270  с.

6.            Schneider  H.  Physiology  of  the  placenta:  development  of  fetal  nutrition  during  pregnancy  //  Z.  Geburtshilfe  Neonatol.  —  1997.  —  V.  201  Suppl.  —  №  1.  —  P.  1—8.

7.            Shubina  O.S.,  Dudenkova  N.A.  Morphological  changes  in  the  structure  of  ovarian    rats  under  the  influence  of  lead  acetate  //  3rd  International  Conference  on  Science  and  Technology,  London,  17—18  June  2013.  London:  SCIEURO,  2013.  —  P.  313—322.

8.            Torry  D.S.,  Torry  R.J.  Angiogenesis  and  the  expression  of  vascular  endothelial  growth  factor  in  endometrium  and  placenta  //  Am.  J.  Reprod.  Immunol.  —  1997  Jan.  —  V.  37.  —  №  1.  —  P.  21—29.