ПЕРСИСТИРОВАНИЕ ПРОТИВОХЛАМИДИЙНЫХ АНТИТЕЛ У КЛИНИЧЕСКИ ЗДОРОВОГО ПЕРСОНАЛА ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЙ ВОЕННО-МЕДИЦИНСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ

Майтанова Шолпан Турсынбековна

соискатель, центр военной медицины МО Республики Казахстан,

Республика Казахстан, г. Алматы

Орозбекова Бубусайра Толобаевна

д-р мед. наук, и. о. проф. кафедры эпидемиологии и микробиологии медицинский факультет Кыргызско Российский Славянский Университет,

Кыргызская Республика, г. Бишкек

Ажикулова Венера Сатвалдиевна

канд. мед. наук, и. о. доц., Ошский Государственный Университет, медицинский факультет,

Кыргызская Республика, г. Ош

E-mail: oosp@rambler.ru

PERSISTANCE OF ANTICHLAMYDIAL ANTIBODIES IN CLINICALLY HEALTHY PERSONNEL OF DIAGNOSTIC LABORATORIES OF MILITARY-MEDICAL ESTABLISHMENTS

Sholpan Maytanova

search engine, Centre of military medicine of the Republic Kazakhstan,

Kazakhstan, Almaty

Bubusayra Orozbekova

dr. med. sciences, obligations of the professor takesdepartment of epidemiology and microbiology of the medical faculty of the Kyrgyz-Russian Slavic University,

Kyrgyzstan, Bishkek,

Venera Agikylova

can. of med. sciences, executes the associate professor's duty Osh State University, faculty of medicine,

Kyrgyzstan, Osh

АННОТАЦИЯ

Были изучены превалентность и персистирование антител к Chlamydophila pneumoniae у клинически здорового персонала диагностических лабораторий военно-медицинских учреждений. Субъекты исследования принадлежали к клинически здоровому на момент его начала персоналу диагностических лабораторий военно-медицинских учреждений, имевшему контакт с кровью в рамках выполнения служебных обязанностей.

Всего было собрано и исследовано на хламидиоз 232 образца сыворотки от 58 человек, в том числе от 43 женщин (74,14 %) и 15 мужчин (25,86 %). Период проспективного наблюдения составил 3 года (с 2011 по 2013 годы).

Установлено, что лабораторные работники, имеющие контакт с кровью, представляют собой группу риска по заражению хламидийной инфекцией, которая протекает преимущественно инаппарантно. Персистирование противохламидийных антител не защищает от повторной инфекции.

ABSTRACT

The prevalence and persistence of antibodies to Chlamydophila pneumoniae in clinically healthy personnel of diagnostic laboratories of military-medical establishments were studied. Subjects of research belonged to the personnel of diagnostic laboratories of military-medical establishments, clinically healthy at the time of its beginning which had contact with blood within realization of official duties.

In total 232 sera samples from 58 persons, including from 43 women (74,14 %) and 15 men (25,86 %), were collected and investigated on chlamydiosis. The period of prospective observation was 3 years (from 2011 to 2013).

It was established that the laboratory workers having contact with blood represent the group of risk of chlamydial infection which carries mainly latent. Persistence of antichlamydial antibodies does not protect from a recurrent infection.

Ключевые слова: Chlamydophila pneumonia; превалентность; персистирование; инаппарантно; контакт; лабораторные исследования; группа риска.

Keywords: Chlamydophila pneumonia; prevalence; persistence; inapparent; contact laboratory research; risk group.

Chlamydia (Chlamydophila) pneumoniae – широко распространённый респираторный патоген, которым инфицированы большинство лиц, достигшие возраста 20 лет. Сероэпидемиологические исследования показывают, что распространённость противохламидийных антител повышается с возрастом в популяции взрослых лиц [7]. Пневмохламидиоз имеет склонность к персистированию, а иммунитет при данной инфекции не носит защитного характера, что обусловливает частые реинфекции. Это приводит к высокой распространённости антител в группе лиц старшего возраста [1; 5].

Персистирующая хламидийная инфекция ассоциирована с развитием ряда хронических заболеваний, таких как бронхиальная астма [3; 4], хронические обструктивные заболевания лёгких [11] и ишемическая болезнь сердца [6; 8; 9].

Сероэпидемиологические исследования показывают, что спорадическая и эпидемическая заболеваемость пневмохламидиозом регистрируется убиквитарно, хотя и более часто – в густонаселённых областях [10]. При этом наиболее часто встречается бессимптомная или малосимптомная форма инфекции с мягкими респираторными проявлениями [2].

Наиболее интенсивная циркуляция возбудителя регистрируется в местах массового скопления людей: школах, цехах и в военных частях и учреждениях [1; 7].

В этой связи целью настоящей работы явилось изучение превалентности и персистирования антител к Chlamydophila pneumoniae у клинически здорового персонала диагностических лабораторий военно-медицинских учреждений.

Материалы и методы.

Субъекты исследования принадлежали к клинически здоровому на момент его начала персоналу диагностических лабораторий военно-медицинских учреждений, имевшему контакт с кровью в рамках выполнения служебных обязанностей.

У всех субъектов в рамках мониторинга состояния их здоровья 4 раза в год забирались образцы сыворотки. Всего было собрано и исследовано на хламидиоз 232 образца сыворотки от 58 человек, в том числе от 43 женщин (74,14 %) и 15 мужчин (25,86 %).

Период проспективного наблюдения составил 3 года (с 2011 по 2013 годы).

Средний возраст наблюдаемого контингента был 38 лет с колебаниями от 19 до 65 лет. Персонал лабораторий был разбит на две возрастные группы: младше 40 лет (32 случая) и 40 лет и старше (26 случаев).

Все образцы сывороток, полученные от каждого случая, исследовались одновременно дабы исключить случайные отклонения титров при использовании различных тестовых наборов.

Проведение лабораторных исследований полученного клинического материала осуществляли согласно модифицированной нами (за счёт включения иммунофлюоресцентных методов) схеме Е.В. Шипициной и соавт. (2004) на базе инфекционной иммунологии N-ского военного госпиталя при методической поддержке специалистов Казахского научного центра карантинных и зоонозных инфекций.

Диагностика хламидийной инфекции осуществлялась с применением метода прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) с поликлональными и моноклональными антителами.

На первом этапе мы осуществляли скрининговое исследование соскобных материалов из ротоглотки и сыворотки крови наблюдаемых лиц для обнаружения антигенов хламидий с помощью иммунофлюоресцентных методов. Иммунофлюоресцентные методы применялись для обнаружения в клиническом материале родоспецифических (групповых) антигенов возбудителя. Для постановки ПИФ с целью диагностики хламидий использовали диагностический набор “Chlamyset Antigen” (Orion diagnostica, Финляндия).

На втором этапе, используя ПИФ на основе моноклональных антител и полимеразную цепную реакцию (ПЦР), проводили верификацию хламидий и хламидофил по видам (C. pneumoniae, С. trachomatis, C. psittaci). Выделение ДНК из клинических проб проводили с использованием тест-систем ДНК-экспресс (НПФ “Литех”, Москва), амплификацию – ПОЛИМИК-Хл (НПФ “Литех”, Москва) в соответствии с инструкциями производителя. Продукты амплификации разделяли электрофорезом в 3 % агарозном геле. Ампликоны вырезали из геля и очищали, используя Wizar PCR Preps DNA Purification System (Promega Corporation, США). Нуклеотидную последовательность ампликонов определяли, используя fmol DNA Cycle Sequencing System (Promega Corporation, Madison, WI, США), согласно инструкциям производителя.

Использовался метод двойных разведений сыворотки, начиная с разведения 1:8. Сероконверсия, подтверждающая хламидийную инфекцию, диагностировалась в случае в случае четырёхкратного нарастания титров противохламидийных антител (Ig G и / или Ig A) по сравнению с сывороткой предшествующего года.

Положительными считались сыворотки при титрах Ig G и A 1:8 и выше.

Статистическая обработка данных.

Статистическая значимость различий непараметрических показателей в сравниваемых группах оценивалась в тесте ХИ-квадрат. Обработка данных проводилась в свободной среде R версии 3.2.0.

Результаты и их обсуждение.

Средняя превалентность титров противохламидийных антител, расцененных как положительные, в группе наблюдения составила 70,69 % (41 / 58) для IgG и 46,55 % (27 / 58) для IgA.

У мужчин превалентность титров противохламидийного IgG (73,33 % [11 / 15]) статистически значимо не отличалась от таковой у женщин (69,77 % [30 / 43]): критерий ХИ-квадрат с поправкой Йейтса составил 1,07; p = 0,302.

Также не было статистически значимых различий в титрах IgA: у мужчин превалентность составила 53,33 % (8 / 15); у женщин – 44,19 % (19 / 43); критерий ХИ-квадрат с поправкой Йейтса составил 0,18; p = 0,6678.

Титры противохламидийного IgG в 39,02 % случаев (16 / 41) колебались в пределах 1:8 – 1:64; в 46,34 % случаев (19 / 41) они превышали значение 1:112.

Титры противохламидийного IgA в целом были ниже, нежели в случае IgG. Лишь в 7,41 % случаев (2 / 27) они достигали значения 1:112 и ни в одном из случаев не достигали значения 1:128. В 62,69 % случаев (17 / 27) титры IgA колебались в пределах 1:8–1:64.

За время проспективного наблюдения положительная сероконверсия по IgG произошла у 5 человек (8,62 %), в том числе у 1 мужчины и 4 женщин; по IgA – у 4 человек (6,9 %), в том числе у 1 мужчины и 3 женщин. Сероконверсии по двум типам иммуноглобулинов мы не наблюдали.

Динамика параметров противохламидийных антител среди клинически здорового персонала лабораторий военно-медицинских учреждений отражена в таблице 1.

Таблица 1.

Динамика противохламидийных антител среди клинически здорового персонала лабораторий военно-медицинских учреждений в различных возрастных группах

Установлено, что возрастные группы младше и старше 40 лет статистически значимо не различались по уровням противохламидийных антител, как IgG, так и IgA, что находит своё объяснение в одинаковых условиях работы, этих возрастных групп, а значит, в равных рисках заражения хламидийной инфекцией.

Ни в одном случае мы не наблюдали одновременной выработки IgG и IgA.

В группе работников моложе 40 лет мы не наблюдали ни положительной, ни отрицательной сероконверсии в течение периода проспективного наблюдения, а по уровню персистирования противохламидийных антител данные лица статистически значимо не отличались от старшей возрастной группы (рисунок 1). Это может свидетельствовать в пользу того, что в случае профессионального заражения хламидиозом у лиц молодого возраста происходит либо элиминация возбудителя за счёт защитных сил макроорганизма, либо протекание инфекции в инаппарантной форме.

Рисунок 1. Возрастная структура персистирования противохламидийных IgG

У лиц старшего возраста, по сравнению с лицами младше 40 лет, статистически значимо возрастают противохламидийные IgG, что свидетельствует о прогрессировании инфекции (превалентность составила 11,54 на 100 обследованных).

У трёх сероконвертированных лиц впоследствии развились клинические симптомы трахеобронхита в 2 случаях и очаговой пневмонии – в 1 случае. ПЦР исследование позволило установить этиологию заболевания: C. pneumoniae в случае трахеобронхита и микст-инфекцию C. pneumoniae + C. psittaci. Из мокроты больного был выделен Staphylococcus aureus; реакция агглютинации с аутоштаммом показала нарастание титра с 1:20 до 1:40.

Мы наблюдали двух женщин 54 и 62 лет с изначально высокими титрами противохламидийных антител (1:112 и 1:96, соответственно). У первой из них отмечалось персистирование антител в течение 2 месяцев, а у второй наступила отрицательная сероконверсия. Впоследствии при проспективном наблюдении у обеих наблюдалось повышение уровней противохламидийных IgG.

Таким образом, лабораторные работники, имеющие контакт с кровью, представляют собой группу риска по заражению хламидийной инфекцией, которая протекает преимущественно инаппарантно. Персистирование противохламидийных антител не защищает от повторной инфекции.

Список литературы:

1. Grayston J.T. Background and current knowledge of Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis // J. Infect. Dis. – 2000. – V. 181 (Suppl. 3). – P. S402–S410.
2. Grayston J.T., Campbell L.A., Kuo C.C. and al. A new respiratory tract pathogen: Chlamydia pneumoniae strain TWAR // J. Infect. Dis. – 1990. – V. 161. – P. 618–625.
3. Hahn D.L., Anttila T., Saikku P. Association of Chlamydia pneumoniae IgA antibodies with recently symptomatic asthma // Epidemiol. Infect. – 1996. – V. 117. – P. 513–517.
4. Hahn D.L., Dodge R.W., Golubjatnikov R. Association of Chlamydia pneumoniae (strain TWAR) infection with wheezing, asthmatic bronchitis, and adult-onset asthma // JAMA. – 1991. – V. 266. – P. 225–230.
5. Koivisto A.L., Isoaho R., Von Hertzen L. and al. Chlamydial antibodies in an elderly Finnish population // Scand. J. Infect. Dis. – 1999. – V. 31. – P. 135–139.
6. O’Connor S., Taylor C., Campbell L.A. et al. Potential infectious etiologies of atherosclerosis: a multifactorial perspective // Emerg. Infect. Dis. – 2001. – V. 7. – P. 780–788.
7. Saikku P. The epidemiology and significance of Chlamydia pneumoniae // J. Infect. – 1992. – V. 25 (Suppl. 1). – P. 27–34.
8. Saikku P., Leinonen M., Mattila K. et al. Serological evidence of an association of a novel Chlamydia, TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infarction // Lancet – 1988. – V. 2. – P. 983–986.
9. Saikku P., Leinonen M., Tenkanen L. and al. Chronic Chlamydia pneumoniae infection as a risk factor for coronary heart disease in the Helsinki Heart Study // Ann. Intern. Med. – 1992. – V. 116. – P. 273–278.
10. Saikku P. Epidemiologic association of Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis: the initial serologic observation and more // J Infect. Dis. – 2000. – V. 181 (Suppl. 3). – P. S411–S413.
11. 11.Diagn. Lab. Immunol. – 2000. – V. 7. – P. 734–738.