ЗАВИСИМОСТЬ РЕГЕНЕРАТИВНОЙ СПОСОБНОСТИ МИКРОФЛОРЫ БИОЦЕНОЗОВ У КРЫС ОТ ДЛИТЕЛЬНОСТИ И СПОСОБА ВВЕДЕНИЯ ЦЕФТРИАКСОНА

Попов Павел Вениаминович

канд. мед. наук, докторант, специалист ЦПП ГУ МВД России по Пермскому краю, г. Пермь

E-mail: popov.pv@list.ru

Сыропятов Борис Яковлевич

д-р мед. наук, профессор, ПГФА, г. Пермь

Одегова Татьяна Фёдоровна

д-р фармацевт. наук, профессор, ректор ПГФА г. Пермь

Проблема резистентности грамположительной инфекции во всем мире, как и в России, является актуальной [2]. Однако отсутствие данных о скорости и механизмах развития резистентности микрофлоры к антибиотикам резко снижает их лечебный эффект, поэтому профилактика антибиотикорезистентности является актуальной задачей [1]. Известно, что развитие резистентности напрямую зависит от длительности введения антибиотика [6], поэтому для профилактики формирования резистентности в настоящее время врачи используют антибиотикопрофилактику [5], для чего противомикробный препарат назначают заранее — за 1 час до какого-либо вмешательства, в разовых дозах, возможно несколько раз, но в течение одних суток [7]. Таким образом, антибиотик назначается пациентам без прямых показаний для профилактики осложнений, которые могут и не возникнуть. Влияние антибиотикопрофилактики на микрофлору до сих пор дискутируются, фундаментальные научные данные скудны, у практических врачей нет единого мнения о ее безопасности и эффективности [8].

Цель работы. Изучить зависимость изменений регенеративной способности микрофлоры биоценозов у крыс от способа введения и длительности применения цефтриаксона.

Материал и методы.

Объектом исследования были крысы-самцы линии Вистар, массой 100 г. Животные были разделены на 2 серии по 5 групп, в каждой группе — 6 животных. Номер группы в серии соответствовал продолжительности курса введения антибиотика, а номер серии зависел от способа введения препарата.

В начале эксперимента у всех животных брались мазки из следующих областей: перианальная, ротовая, левый и правый наружные слуховые проходы для определения исходной резистентности микрофлоры к цефтриаксону, что осуществлялось следующим образом: шпатель после мазка опускали в пробирку с 5 мл мясопептонного бульона на 1 ч при комнатной температуре, далее в неё добавляли цефтриаксон из расчёта 50 мг/л для определения исходной резистентности, затем все пробирки от каждого животного помещали на 1 сут в термостат при температуре 35,5⁰С. Далее всем животным I серии внутримышечно вводили цефтриаксон в дозе 50 мг/кг/сут. Животным II серии вводили цефтриаксон в дозе 50 мг/кг/сут лимфотропно в заднюю стопу [3]. Цефтриаксон удобен для эксперимента, т.к. его можно вводить 1 раз в сутки, данная концентрация является максимально допустимой, выводится с мочой и жёлчью, кишечная палочка разрушает его в неактивные, но достаточно токсичные метаболиты.

На следующий день определяли мутность в пробирках относительно стерильного мясопептонного бульона в кюветах толщиной 3,3 мм, длиной волны 45 нм, при этих параметрах показатели мутности имели наименьшее отклонения. По степени мутности косвенно определяли концентрацию микробных частиц, которые могут размножаться в мясопептонном бульоне, данный способ удобен своей простотой и скоростью. Через сутки повторно определяли оптическую плотность культуры при хранении пробирок в аналогичных условиях.

Регенеративную способность микрофлоры invitro рассчитывали путём вычитания из большего показателя меньшего.

В первых группах обеих серий делали мазки из указанных биоценозов и этих животных выводили из эксперимента. В других группах продолжали вводить антибиотик в той же концентрации соответственно номеру серии.

На следующий день эти действия повторяли во вторых группах каждой серии, и так далее пять дней, т. е. во всех группах.

Математический и статистический анализы полученных данных производили с использованием аналитической программы Statistica 6.0.

Результаты и обсуждение.

Полученные результаты представлены в табл. 1, 2.

Таблица 1

Регенеративная способность микрофлоры биоценозов белых крыс на фоне внутримышечного введения цефтриаксона в дозе 50 мг/кг/сутки (М ±m)

* — различия достоверны (p<0,05) относительно исходных данных.

Исходные данные регенеративной способностимикроорганизмов биоценозов определили во всех исследуемых биоценозах пяти групп животных. Самые высокие показатели обнаружили в биоценозах перианальной области и ротовой полости, ведь здесь находится самая многочисленная, разнообразная и вирулентная микрофлора.

Через 1 сутки после первого введения антибиотика во всех биоценозах регенеративные свойства достоверно значимо увеличились (p<0,05), это скорей связано с изменением состава микрофлоры. Происходит резкое угнетение той части микрофлоры, которая чувствительная к действию данного препарата. Нечувствительная и малочувствительная части при уменьшении конкуренции обладают максимальными регенеративными свойствами.

В последующие дни эксперимента регенеративная способность плавно уменьшается за счёт нарастания концентрации цефтриаксона во всех тканях микроорганизма.

На 5-ые сут способность размножения микроорганизмов максимально угнетается т.к. начинает действовать токсическое свойство антибиотика на всю микрофлору.

В таблице 2 представлены данные II серии экспериментальных животных.

Таблица 2

Регенеративная способность микрофлоры биоценозов белых крыс на фоне лимфотропного введения цефтриаксона в дозе 50 мг/кг/сутки (М ±m) под подушечку задней стопы

* — различия достоверны (p<0,05) относительно исходных данных.

При региональном лимфотропном способе введения препарата его концентрация намного выше и она сохраняется дольше в лимфатическом регионе относительно внутримышечного введения [3]. Биоценоз перианальной области в данном случае является региональным, здесь концентрация цефтриаксона на 1-ые сут достигает достоверно значимо максимальных значений (p<0,05), что приводит к полному угнетению чувствительной и малочувствительной микрофлоры. В других отдалённых биоценозах концентрация препарата намного ниже и микрофлора практически не изменяется, как и её регенеративные свойства, во всех сроках эксперимента.

На 2-ые сут регенеративная способность микрофлоры биоценоза перианальной области сопоставима с исходными данными, но за счёт накопления токсических доз с 4-ых сут происходит снижение значений. В I-ой серии это происходит на 5-ые сут эксперимента.

Заключение.

Регенеративная способность микрофлоры изучаемых биоценозов белых крыс на фоне внутримышечного и лимфотропного введения цефтриаксона в максимальной дозе 50 мг/кг/сутки зависит от длительности курса антибиотикотерапии в различной степени. После однократного внутримышечного введения регенеративные свойства максимальны и сравниваются с исходным уровнем на 3—4-ые сут. К 5-ым сут при достижении токсических доз антибиотика регенеративная способность всей микрофлоры минимальна. При лимфотропном методе введения в отдалённых регионах во всех сроках эксперимента изменения достоверно незначимы. Только в близлежащем лимфатическом регионе регенеративная способность микрофлоры достоверно значимо увеличивается и нормализуется к исходным значениям на 2-ые сут, а при внутримышечном введении это происходит на сутки позже.

Таким образом, региональная лимфотропная антибиотикотерапия даже в максимальных дозах менее влияет на регенеративную способность микрофлоры отдалённых биоценозах, что доказывает о менее выраженных дисбактериозах и преимуществе перед внутримышечном способе введения антибиотиков.

Список литературы:

1. Антибактериальные лекарственные средства. Методы стандартизации препаратов.— М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2004. — С. 55—71.
2. Белобородов В.Б. Резистентные грамположительные микроорганизмы: современные возможности и перспективы терапии. Бактериальные инфекции // Consilium Medicum Том 06/N 1/2004
3. Левин Ю.М; Эндоэкологическая медицина и эпицентральная терапия. Новые принципы и методы. М.: Щербинская типография, 2000. — 344 с.
4. Попов П.В., Сыропятов Б.Я., Одегова Т.Ф. Зависимость изменений микрофлоры биоценозов и её резистентности у крыс от длительности применения цефтриаксона. // Вестник ВолГМУ. — Волгоград, 2011.-№ 4(40). — С. 78—80.
5. Сидоренко С.В. Антибактериальная терапия: кризис жанра или свет в конце тоннеля? // РМЖ. — Т.11, № 18(190), 2003. — С. 997—1001.
6. Страчунский Л.С., Белоусов Ю.Б., Козлов С.Н. // Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. — М., 2002. — С. 393—397.
7. Эпидемиология антибиотикорезистентности нозокоминальных штаммов Staphylococcus aureus в России: результаты многоцентрового исследования / Дехнич А.В., Эйдельштейн И.А., Нарезкина А.Д. и др. // Клиническая микробиология антимикробная химиотерапия. — 2002. — Т.4, № 4. — С. 325—336.
8. Stratchounski L.S., Kozlov R.S., Appelbaum P.C., Kretchikova O.I., Kosowska-Shick K. Antimicrobial resistance of nasopharyngeal pneumococci from children from day-care centres and orphanages in Russia: results of a unique prospective multicentre study. Clin Microbiol Infect 2006; 12: 853-866.