МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТРОМАЛЬНОГО КОМПОНЕНТА СЕМЕННИКОВ У ДЕТЕЙ РАЗЛИЧНОГО ВОЗРАСТА

Буньков Кирилл Вадимович

кафедра патологической анатомии, СГМА, г. Смоленск

E-mail: grei.dorian2015@yandex.ru

Введение

Несмотря на множество публикаций, посвященных крипторхизму, механизмы возникновения этой болезни остаются до настоящего времени не вполне ясными. Это затрудняет организацию строго патогенетического лечения и ухудшает ближайшие и отдаленные результаты терапии. Одной из причин крипторхизма может явиться как следствием генетических так и эндокринных патологий. В последнее время большинство ученых считают, что изменение экологической обстановки на земле привела к индукции аутоиммунных реакций в сочетании с андрогенами в организме человека, регулирующими иммунный ответ, что в некоторой степени может индуцировать процессы задержки опущения яичка в мошонку.

Концепция стромально-паренхиматозных взаимодействий стала основой для изучения закономерностей органогенеза и объяснения протекания морфогенетических и гормональных процессов в онтогенезе человека. За последние 50 лет гистологические исследования внесли огромный вклад в понимание о происходящих процессах, как в строме, так и в паренхиме яичка.

Гистологическая картина в не опустившихся яичках разнообразна и зависит от длительности и месторасположения семенных желез при крипторхизме.

Изменения яичек при крипторхизме и эктопии разнообразны. В детстве яички имеют, как правило, нормальное строение, соответствующее возрасту, или бывают несколько недоразвиты; рано или поздно в нем возникает атрофия, дистрофия, иногда фиброз. Начало этих изменений совпадает в основном с периодом полового созревания. При абдоминальном крипторхизме чаще наблюдается просто атрофия, при задержке яичка в паховом канале — сочетание атрофии с фиброзом [5].

В строме гонад, у больных с синдромом дисгенезии тестикулов, уже с 3 лет наблюдается появление клеток — предшественников клеток Лейдига, хотя морфологически они еще мало отличимы от обычных стромальных клеток. Клетки Лейдига взрослых морфологически идентичны клеткам Лейдига больных юношеского возраста и здоровых лиц аналогичного возраста. Явления очаговой или диффузной гиперплазии выражены в такой же степени, как и в юности [3]. Все выше приведенные данные указывают лишь общепатологические и неспецифические изменения в семенниках у детей при крипторпхизме и основаны исключительно на визуальных наблюдениях.

Изменения стромального компонента и его составляющих, мы попытались рассматривать с позиций возрастного аспекта на современных этапах исследования.

В работе [9], по изучению соотношения между площадью канальцев и интерстициальной ткани, было показано, что в период с 8—12 недели внутриутробного развития происходит постепенное увеличение количества и дифференциация клеток Лейдига. В свою очередь с 16 по 27 неделю пренатального развития интерстициальная ткань постепенного инволютирует (60 %), и в семенниках
27-недельного плода занимаемая площадь составляет около 50 % [9]. Подобная картина наблюдается и в работах других авторов, так у плодов 22—27 недель с экстремально низкой массой тела, на площадь стромы приходится 58,540,19 %, на сосуды 1,880,01 % [6]. Начиная с 11-й по 25-ю неделю внутриутробного развития, отмечается высокая тестостеронсинтезирующая способность клеток Лейдига, и их количественное увеличение [2].

В литературе имеется достаточное количество данных об изучении как стромального так и паренхиматозного компонентов яичка, но как правило имеются сведения об изучении отдаленных результатов после орхопексии [11].

Целью данной работы — дать сравнительную характеристику морфометрических исследований стромального компонента семенников и указать его составляющие и их относительное изменение в зависимости от их ретенции и возраста у детей при крипторхизме.

Материалы и методы

Были изучены биоптаты неопустившихся яичек 42 детей в возрасте от 8 месяцев до 14 лет с односторонним крипторхизмом. Преобладали дети младшей возрастной группы. Так, до года 8, 10 месяцев обследовано 2 пациента (5 %), от 1 года до 2 лет — 17 (40 %), от 3 до 4 лет — 10 (24 %), от 5 до 6 лет — 3 (7 %), от 7 до 8 лет — 4 (9 %), от 9 до 10 лет — 4 (9 %), старше 10 лет — 2 (5 %) по 14 лет.

Биоптаты фиксировали по общепринятым гистологическим методикам с использованием забуференного нейтрального 10 % формалина не менее 3-х суток. Депапафинированные гистологические срезы толщиной 7—8 мкм окрашивались по общепринятым методикам с использованием красителей гематоксилина и эозина, для общей топографии тканей органа и пикрофуксина по методу ван Гизон для выявления клеточных составляющих соединительной ткани — фибробластов, фиброцитов в фиброзномышечной строме яичка.

Оценка клеточных популяций: выбранные избирательно для подсчета клетки входящие в строму яичка (клетки Лейдига, фибробласты, фиброциты), подсчитывали в каждом отдельном случае в 10-ти полях зрения, центром которого служил капилляр. Оценку проводили по бальной системе: полное отсутствие клеток одной из исследуемых клеточной популяции — 0 баллов, наличие от 1—5 клеток — 1 балл, 6—10 клеток — 2 балла, 11—30 клеток — 3 балла, более 30 клеток — 4 балла. Данная методика оценки разработана по материалам статьи [11].

Исследование проводилось на бинокулярном микроскопе Axiostar plus ZEIZZ, оборудованном цифровой фотокамерой Sony, Морфологические изображения, поступающие через оптическую систему микроскопа (увеличение×1000: объектив 100, окуляр 10), регистрировались цифровой цветной видеокамерой ProgRes C10^plus, вмонтированной в тубус микроскопа, и передавались в компьютер.

В десяти полях зрения каждого случая, центром которого служил капилляр, проводили подсчет площади занимаемой стромой (строма А), семенными канальцами и максимальный (длина) и минимальный (ширина) диаметры просвета капилляра. Отдельно проводили измерение площади стромы без её клеточных составляющих (строма В).

Сравнительный анализ строма А по отношению к общей площади поля зрения и стромы В по отношению к строме А, проводили в относительных величинах. Измерения проводили в полуавтоматическом режиме с помощью системы компьютерного анализа изображений «ВидеоТест» — морфология, версия 4.0 (Санкт-Петербург). Исследуемы параметры измерялись как в реальных величинах (мкм), так и в точках на пикселы и дальнейшего перевода их в относительные величины. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ NCSS Statistica. При статистической обработке результатов указывали средние морфометрические показатели: среднее значение, стандартное отклонение. Корелляционную зависимость рассчитывали по методу Спирмена. Различия считали статистически достоверными при p<0,05.

Результаты и обсуждение

На основании разработанной нами методики и алгоритма исследования были получены следующие результаты.

В нашем исследовании, существенное значение имеет то, что у детей при крипторхизме, строма имеет не постоянную площадь и изменяется в зависимости от возраста и расположения самого яичка.

В таблице 1 приведены средние относительные значения площади ( %) приходящиеся на строму (строма А), семенные канальцы, строму без её клеточных составляющих (строма В) и на клеточные популяции.

Таблица 1.

Динамика морфометрических показателей яичка в различных возрастных группах при крипторхизме ( %)

Так у детей до года строма занимает всего 22,358,82 %, что связано с компактным расположением семенных канальцев, количество их составляет от 3 до 4 в поле зрения, на которые приходится 77,658,82 %. Интерстициальные гландулоциты малых размеров, пикнотизированными ядрами в большей части исследуемых полей зрения вообще отсутствовали.

В возрастной группе 1—2 года наблюдается резкое увеличение площади стромы 55,049,77 % и уже с этого момента на первый взгляд все исследуемые случаи имеют практически одинаковую картину, которая прослеживается до 4 летнего возраста. Морфометрическая картина стромы А, в данный возрастной период, с учетом стандартного отклонения, практически одинакова и составляет от 1—2 года — 55,049,77 %, от 3 — 4 лет 54,137,04 %. Увеличение площади интерстициальной ткани и рыхлым расположением семенных канальцев связано с её отеком, причем независимо от исследуемого поля и наличия или отсутствия сосудов микроциркуляторного русла в нем.

Максимальное значение площади стромы (стромы А) приходится на возраст 5—6 лет и составляет 64,103,35 % и прослеживается в дальнейшем. После 6 лет стромальный компонент относительно стабилен и незначительно меняет свои показатели. Обращает на себя внимание наличие по отдельным показателям, в частности площади стромы и семенных канальцев, в возрасте 14 лет (>10 лет) с группой исследуемых — до года. В данных возрастных группах средние показатели площади стромы составили: до года — 22,358,82 %, старше 10 лет — 31,4722,11 %, площади занимаемых семенными канальцами — до года — 77,658,82 %, старше 10 лет — 68,5222,11 %, что указывает на их схожесть как визуально микроскопически, так и морфометрически.

При микроскопическом исследовании семенников немаловажно обращать внимание не только на наличие занимаемой площадью стромы, но и на её составляющие, участвующие в гормональной морфофункциональной активности семенников, таких как клетки Лейдига — интерстициальные гландулоциты. Большая часть исследователей отмечают их параметрические данные, что является немаловажной характеристикой. Другие клеточные популяции, такие как фибробласты, фиброциты, вообще пропускаются исследователями. По данным литературы имеются сведения о цитологическом изучении интерстициальной ткани семенников млекопитающих, при одно- и двустороннем крипторхизме, а именно указания о наличии дегенеративных изменениях и нарушении дифференцировки как зрелых так и не незрелых клеток Лейдига и фибробластов, что опосредованно ведет к снижению выработки стероидных гормонов [12].

В большей части исследуемых случаев второй группы, преобладали интерстициальные гландулоциты малых размеров, округлой и многоугольной формы, распределялись по отдельности, не образовывая скоплений. Ядра их были овальной и вытянутой формы, гиперхромные. Общая картина распределения клеток Лейдига в интерстициальной ткани до 5—6 летнего возраста, за исключением единичных случаев, носила диффузный характер. Интерстициальные гландулоциты располагались по раздельности, в их цитоплазме редко встречались липидные капли. Ядра их были овальной формы, гиперхромные с плотно расположенным гетерохроматином. В меньшем количестве обнаруживались средние и крупные клетки Лейдига. Не однородный характер представлена ткань семенников
7—8 летнего возраста, отчетливо видны группы интерстициальных клеток образовывающих отдельные островки, между которыми имеются прослойки коллагеновых волокон с четкими контурами фибробластов вытянутой и овальной формы. В таблице 2 представлена балльно — ранговая характеристика отдельных клеточных популяций интерстициальной ткани семенников у детей различного возраста при крипторхизме, за основу взяты данные проведенные в работах по исследованию биопсийного материала у пациентов 47 лет, в среднем, через 25 лет после орхопексии. По этим данным среднее значение, приходящее на стромальную площадь, составило 32,612,5 %, балльное количество клеток Лейдига — 1,61,2 [11]. Для сравнения мы представили их в нашей таблице. Диапазон рангового разброса интерстициальных гландулоцитов, начиная с одного года и до 6 лет представлен от 0,0 до 3,0, что составляет не более 30 клеток в исследуемых полях зрения или полное их отсутствие, лишь к семи годам их становится более 30. После 8 лет во всех полях зрения имеются клетки Лейдига и диапазон разброса составляет от 0,1 до 3,0, старше десяти лет не превышает 2,0 баллов.

Так, в возрасте до года разность между стромой А и В составила 43,2822,71 %, что и соответственно приходится на клеточные популяции. Начиная с 1 года и до 2 лет, наблюдается увеличение площади стромы В, что связано с отеком интерстициальной ткани, который составляет 74,248,68 %, соответственно на клеточные элементы приходится 25,768,68 %, что на 17,47 % меньше, в исследуемых случаях до года. В возрастных группах 3—4 лет и 5—6 лет наблюдается тенденция к увеличению площади В и составляет 77,007,44 %, 78,503,75 % соответственно. После 6 лет в отдельных случаях отмечается как визуально, так и морфометрически незначительная вариабельность стромы — её уплотнение, что может приводить к опосредованному уменьшению показателей её площади.