Статья опубликована в рамках: XIV Международной научно-практической конференции «Современная медицина: актуальные вопросы» (Россия, г. Новосибирск, 14 января 2013 г.)
Наука: Медицина
Секция: Фармацевтическая химия, фармакогнозия
Скачать книгу(-и): Сборник статей конференции
- Условия публикаций
- Все статьи конференции
дипломов
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЕНОЛОКИСЛОТ В ТРАВЕ ХВОЩА ЛЕСНОГО
Бондарчук Руслан Анатольевич
соискатель кафедры фармакогнозии с курсами ботаники и экологии Сибирского государственного медицинского университета,
г. Томск
E-mail: bondarchuk686@mail.ru
Коломиец Наталья Эдуардовна
д-р фармацевт. наук,
профессор кафедры фармакогнозии с курсами ботаники и экологии
Сибирского государственного медицинского университета,
г. Томск
E-mail: borkol47@mail.ru
Смолякова Ирина Михайловна
канд. фармацевт. наук,
доцент кафедры фармацевтической технологии
Сибирского государственного медицинского университета,
г. Томск
E-mail: iren-sm@mail.ru
Марьин Андрей Александрович
канд. фармацевт. наук, доцент кафедры фармацевтической технологии Кемеровской государственной медицинской академии, г. Кемерово
E-mail: mfandr@mail.ru
Одной из групп биологически активных веществ по которым можно проводить стандартизацию травы хвоща лесного являются фенолокислоты [2]. При этом содержание фенолокислот нами предложено определять методом прямой спектрофотометрии в пересчете на кофейную кислоту. Однако для того, чтобы предлагаемая методика заняла заслуженное место в системе обеспечения качества лекарственных средств, гарантируя достоверные и точные результаты анализа, дополнительно необходимо провести процедуру ее валидации.Валидация дает понимание сути методики, осознание необходимости строгого соблюдения ее параметров, позволяет выявить недостатки и внести соответствующие коррективы на ранних стадиях разработки, что позволяет значительно снизить вероятность ошибок [1; 5].
В связи с этим, целью данной работы явилось изучение степени пригодности предлагаемой методики прямого спектрофотометрического определения суммы фенолокислот в траве хвоща лесного.
Материалы и методы
Объектами исследования являлись образцы надземной травы хвоща лесного. Отбор проб для анализа, изучение характеристик подлинности и показателей качества осуществляли, руководствуясь общими статьями Государственной Фармакопеи XI издания [4].
Количественное определение фенолокислот проводили методом прямого спектрофотометрического определения. При этом принятое опорное значение содержания фенолокислот в пересчете на кофейную кислоту в траве хвоща лесного составило 0,252 ± 0,002 %.
Валидация методики проведена по прецизионности (повторяемость), воспроизводимости (лабораторная и межлабораторная), правильности и линейности [3; 5]. Статистическую обработку результатов выполняли с помощью пакета прикладных программ «StatisticaforWindows 8.0».
Результаты исследования
Повторяемость методики определяли в условиях, при которых шесть независимых результатов измерений получали одним методом, в одной лаборатории, одним лаборантом-исследователем, с использованием одного спектрофотометра, в пределах короткого промежутка времени. Статистическая обработка полученных результатов, показала, что они достоверны при доверительной вероятности 95 %, вычисленные значения величины относительного стандартного отклонения (RSD) — 2,37 % и относительного доверительного интервала среднего значения — 2,10 % не превышают критериев приемлемости — 5 %, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости (табл.1).
Таблица 1.
Результаты оценки повторяемости методики
|
Образцы |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
||
|
Оптическая плотность |
0,617 |
0,596 |
0,600 |
0,622 |
0,627 |
0,625 |
||
|
Содержание фенолокислот, % |
0,250 |
0,245 |
0,248 |
0,254 |
0,260 |
0,257 |
||
|
f |
Хср |
S² |
S |
Sх |
SR, % |
P (%) |
t |
|
|
6 |
0,252 |
0,000032 |
0,00569 |
0,002324 |
0,56 |
95 |
2,57 |
|
Примечание: f —число степеней свободы, Хср — среднее выборки,
S² — дисперсия, S — стандартное отклонение, Sх— стандартное отклонение среднего результата (стандартная ошибка), SR—относительное стандартное отклонение расчетной величины, Р —доверительная вероятность, t — критерий Стьюдента
Воспроизводимость методики определяли на идентичных образцах сырья совместным оценочным экспериментом в трех различных лабораториях СибГМУ на различных приборах, разными лаборантами-исследователями по 3 испытания образца на 3-х разных уровнях концентраций в интервале 80—120 % от принятого опорного значения (табл. 2). Статистическое тестирование выбросов проводили с использованием критерия Кохрена, дисперсии и стандартного отклонения для каждого уровня и рассчитывали по ГОСТ Р ИСО [3]. При рассмотрении данных, не обнаружив, какой либо зависимости, в качестве показателей прецизионности, нами были выбраны средние значения стандартных отклонений. Данные значения стандартных отклонений могут быть применены в диапазоне содержания фенолокислот 0,020 до 0,040 по массе. Меры прецизионности для данного метода измерений не превышают критериев приемлемости как для внутрилабораторной прецизионности 1,86 % < 5 %, так и для межлабораторной прецизионности 4,05 % < 10 %, что указывает на удовлетворительную воспроизводимость методики.
Таблица 2.
Результаты оценки воспроизводимости методики
|
|
Лаборатория |
|||||||||
|
№ 1 |
№ 2 |
№ 3 |
||||||||
|
Образцы |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
|
Оптическая плотность D1 |
0,600 |
0,570 |
0,419 |
0,532 |
0,508 |
0,334 |
0,496 |
0,406 |
0,447 |
|
|
Оптическая плотность D2 |
0,617 |
0,569 |
0,484 |
0,543 |
0,527 |
0,349 |
0,504 |
0,420 |
0,460 |
|
|
Оптическая плотность D3 |
0,622 |
0,552 |
0,409 |
0,530 |
0,498 |
0,326 |
0,484 |
0,398 |
0,432 |
|
|
Содержание ФК, Х1 |
0,247 |
0,225 |
0,197 |
0,238 |
0,211 |
0,191 |
0,250 |
0,206 |
0,190 |
|
|
Содержание ФК, Х2 |
0,250 |
0,223 |
0,204 |
0,236 |
0,213 |
0,194 |
0,252 |
0,210 |
0,195 |
|
|
Содержание ФК, Х3 |
0,252 |
0,219 |
0,198 |
0,230 |
0,209 |
0,190 |
0,245 |
0,203 |
0,187 |
|
|
Лабор-я |
уровни |
Хср |
S² |
S |
Sх |
SR, % |
Р, % |
t |
RSD, % |
|
|
1 |
1 |
0,250 |
0,0000065 |
0,00255 |
0,00147 |
0,25 |
95 |
2,57 |
1,51 |
|
|
1 |
2 |
0,222 |
0,0000095 |
0,00308 |
0,00178 |
0,31 |
95 |
2,57 |
2,06 |
|
|
1 |
3 |
0,200 |
0,0000145 |
0,00381 |
0,00219 |
0,38 |
95 |
2,57 |
2,82 |
|
|
2 |
1 |
0,235 |
0,0000175 |
0,00418 |
0,00241 |
0,42 |
95 |
2,57 |
2,64 |
|
|
2 |
2 |
0,211 |
0,000004 |
0,002 |
0,00115 |
0,20 |
95 |
2,57 |
1,41 |
|
|
2 |
3 |
0,192 |
0,0000046 |
0,00212 |
0,00122 |
0,21 |
95 |
2,57 |
1,64 |
|
Примечание: ФК — фенолокислоты, Хср — среднее выборки,
S² — дисперсия, S —стандартное отклонение, Sх — стандартное отклонение среднего результата (стандартная ошибка), SR— относительное стандартное отклонение расчетной величины, Р —доверительная вероятность, t — критерий Стьюдента.
Правильность методики устанавливали на идентичных образцах травы хвоща лесного с добавлением известного количества рабочего стандартного образца кофейной кислоты по 3 испытания образца на 3-х уровнях концентраций (табл. 3). Критерий приемлемости — средний процент восстановления при использовании растворов заданных концентраций, скорректированный на 100 %, средняя величина которого должна находиться в пределах 100 ± 5 %. В разработанной методике процент восстановления находился в пределах от 96,72 % до 103,09 %, его средняя величина составила 99,41 %.
Таблица 3.
Результаты определения правильности методики
|
Уровни |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
Оптическая плотность |
0,490 |
0,502 |
0,486 |
0,610 |
0,618 |
0,614 |
0,736 |
0,730 |
0,740 |
|
Содержание ФК, мг |
0,13 |
0,14 |
0,13 |
0,19 |
0,19 |
0,19 |
0,25 |
0,24 |
0,25 |
|
Добавлено кофейной кислоты, мг |
0,005 |
0,005 |
0,005 |
0,010 |
0,010 |
0,010 |
0,015 |
0,015 |
0,015 |
|
Содержание ФК ожидаемое, мг |
0,18 |
0,19 |
0,18 |
0,29 |
0,29 |
0,29 |
0,40 |
0,39 |
0,40 |
|
Оптическая плотность |
0,610 |
0,627 |
0,583 |
0,846 |
0,823 |
0,800 |
1,020 |
1,028 |
1,030 |
|
Содержание ФК полученное, мг |
0,19 |
0,20 |
0,17 |
0,30 |
0,29 |
0,28 |
0,38 |
0,38 |
0,38 |
|
Ошибка, % |
102,3 |
103,1 |
98,5 |
102,9 |
99,1 |
96,8 |
96,7 |
98,0 |
97,3 |
Линейность аналитической методики определяли на 5-ти уровнях концентраций от принятого опорного значения расчетной величины (0,25 %). В ходе определения линейности установлено, что график зависимости имеет линейный характер в области концентрации суммы фенолокислот, значение остаточного стандартного отклонения равно 0,311, коэффициент корреляции близок к единице (0,999), это свидетельствует о сильной линейной зависимости значения оптической плотности от содержания действующих веществ.
Заключение
Проведена валидация методики прямого спектрофотометрического определения фенолокислот в траве хвоща лесного по прецизионности и воспроизводимости, правильности и линейности. Полученные резуль-таты позволяют сделать заключение о том, что предлагаемая методика является высокочувствительной, правильной и воспроизводимой.
Список литературы:
- Аладышева Ж.И., Беляев В.В., Береговых В.В. Практические аспекты работ по валидации аналитических методик // Фармация. — 2008. — № 7. — С. 9—14.
- Бондарчук Р.А., Н.Э. Коломиец Исследование фенольных соединений хвоща лесного Equisetum sylvaticum L. // Бюллетень сибирской медицины. — 2011. — № 5. — С. 25—29.
- ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений. М.: ИПК Издательство стандартов. — 2002. — 42 с.
- Государственная фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа. / МЗ СССР. — 11-е изд., доп. — М: Медицина, 1987. — 335 с.
- Руководство ICH Валидация аналитических методик. Содержание и методология» Q2(R1); Официальные документы // Фармация. — 2008. — № 4. — С. 7—10.
дипломов
Оставить комментарий