ЛИМФОИДНЫЕ  ОБРАЗОВАНИЯ  СЛЕПОЙ  КИШКИ  КРЫС  ПОСЛЕ  ОБЛУЧЕНИЯ

Куница  Виктор  Николаевич

канд.  мед.  наук,  доцент  кафедры  анатомии  человек,  Крымского  медицинского  университета,  РФ,  Республика  Крым,  г.  Симферополь.

E-mail:  Kunitsa-viktor@mail.ru

Девятова  Нина  Викторовна

соискатель  кафедры  анатомии  человека  Крымского  медицинского  университета,  РФ,  Республика  Крым,  г.  Симферополь.

Кривенцов  Максим  Андреевич

канд.  мед.  наук,  доцент  кафедры  анатомии  человека  Крымского  медицинского  университета,  РФ,  Республика  Крым,  г.  Симферополь.

Новосельская  Наталья  Александровна

канд.  мед.  наук,  доцент  кафедры  анатомии  человека  Крымского  медицинского  университета,  РФ,  Республика  Крым,  г.  Симферополь.

Куница  Владислава  Викторовна

студент  3-го  курса  Крымского  медицинского  университета,  РФ,  Республика  Крым,  г.  Симферополь

BLIND  GUT  LYMPHADENOID  OF  RATS  AFTER  RADIATION

Viktor  Kunitsa

candidate  of  Medical  Sciences,  Associate  professor  of  Human  Anatomy  Chair,  Crimea  Medical  University,  Russia,  Republic  of  Crimea,  Simferopol

Nina  Devyatova

applicant,  Human  Anatomy  Chair,  Crimea  Medical  University,  Russia,  Republic  of  Crimea,  Simferopol

Maksim  Kriventsov

candidate  of  Medical  Sciences,  Associate  professor  of  Human  Anatomy  Chair,  Crimea  Medical  University,  Russia,  Republic  of  Crimea,  Simferopol

Natalia  Novoselskaya

candidate  of  Medical  Sciences,  Associate  professor  of  Human  Anatomy  Chair,  Crimea  Medical  University,  Russia,  Republic  of  Crimea,  Simferopol

Vladislava  Kunitsa

3-year  student  of  Crimea  Medical  University,  Russia,  Republic  of  Crimea,  Simferopol

АННОТАЦИЯ

У  самцов  белых  крыс  проводили  облучение  на  линейном  ускорителе  Clinac  2100  разовой  дозой  5  Грэй.  Изучали  лимфоидные  образования  слепой  кишки  и  показатели  крови.  Изменяется  цитоархитектоники  всего  лимфоидного  аппарата  слепой  кишки.  Уменьшается  плотность  расположения  клеток  лимфоидной  ткани.  Повышается  содержание  деструктивно-измененных  клеток,  подавляется  пролиферация,  снижаются  процессы  созревания  и  дифференцировки  лимфоцитов.  В  крови  отмечается  выраженная  лейкопения  с  лимфопенией  и  относительным  нейтрофилезом.  Через  месяц  восстановление  лимфоидных  структур  и  крови  не  происходит. 

ABSTRACT

In  male  albino  rats  a  linear  accelerator  radiation  on  Clinac  2100  with  a  single  dose  of  5  Gray  was  carried  out.  Lymphadenoids  of  the  blind  gut  and  blood  parameters  were  under  study.  Cytoarchitectonics  of  all  lymphoid  apparatus  of  the  blind  gut  is  changing.  The  density  of  the  cells  of  the  lymphoid  tissue  decreases.  Destructive  and  transformed  cells  count  increases,  proliferation  is  depressed,  maturation  and  differentiation  of  lymphocytes  are  reduced.  In  the  blood  significant  leukopenia  with  lymphopenia  and  relative  neutrophilia  is  marked.  A  month  later,  the  restoration  of  lymphoid  structures  does  not  occur. 

Ключевые  слова:  лимфоидные  образования;  слепая  кишка;  облучение.

Keywords:  lymphadenoids;  blind  gut;  radiation. 

Лимфоидные  образования  органов  пищеварения  являются  частью  иммунной  системы,  осуществляющей  иммунобиологический  контроль  за  воздействием  на  организм  факторов  эндогенного  и  экзогенного  происхождения  [1;  12].  Являясь  важным  биологическим  барьером,  лимфоидные  образования  слизистых  оболочек  одними  из  первых  взаимодействуют  с  генетически  чужеродными  веществами,  в  том  числе,  возбудителями  инфекции  [6].  В  результате  воздействий  на  организм  различных  неблагоприятных  факторов  внешней  среды  защитные  силы  организма  ослабляют,  снижается  иммунитет  [4;  11].

Одним  из  таких  неблагоприятных  факторов  является  радиация.  Влияя  на  организм  в  целом  и  на  отдельные  его  функции,  облучение  вызывает  стойкие  изменения  органов  иммунитета,  системы  крови,  и  т.  д.  [5;  7].  Несмотря  на  значительное  количество  работ,  как  отечественных,  так  и  зарубежных  авторов,  посвященных  изучению  влияния  радиации  на  органы  и  ткани,  до  сих  пор  окончательно  не  уточнено  влияние  её  на  лимфоидную  ткань  кишечника  и  систему  крови,  имеющиеся  данные  противоречивы  [7;  12].  Анализ  данных  литературы  показывает,  что  при  ионизирующем  облучении  происходят  тонкие  и  сложные  механизмы  нарушений  в  лимфоидных  органах,  требующие  дальнейшего  детального  изучения  для  прогнозирования  и  возможной  коррекции  иммунологических  и  биохимических  сдвигов  [8;  9]. 

Мы  поставили  перед  собой  цель  изучить  реактивные  изменения  лимфоидной  ткани  кишечника,  наступающие  вследствие  облучения.  Конечной  задачей  исследования  было  найти  способ  защиты  от  этих  изменений.  Параллельно  изучали  изменения  в  периферической  крови.  Объектом  исследования  послужила  слепая  кишка  крыс.  Занимая  пограничное  положение  между  тонкой  кишкой  и  восходящим  отделом  толстой  кишки,  слепая  кишка  представляет  собой  резервуар,  куда  поступают  непереваренные  пищевые  массы  и  где  происходят  сложные  биохимические  процессы.  Кроме  того,  у  крыс  она  выполняет  и  функцию  аппендикса  [3;  10].

Эксперименты  выполнены  на  самцах  белых  крыс  линии  Вистар,  возраста  3,5—5  месяцев,  массой  тела  на  момент  эксперимента  150—170  г.  Облучение  производилось  на  линейном  ускорителе  Clinac  2100.  Фотонное  излучение:  энергия  линейного  ускорителя  —  6  МэВ,  время  экспозиции  —  50  сек,  разовая  доза  —  5  Грэй,  размер  поля  40  см  х  40  см,  глубина  проникновения  —  2,5  см.  Все  исследования  проводили  в  соответствии  с  требованиями  Женевской  конвенции  «International  Guiding  Principlesfor  Biomedical  Research  Inroling  Animals»  (Geneva,1990).  Извлекали  слепую  кишку,  после  промывки  помещали  в  стеклянную  банку  с  10  %  нейтральным  формалином.  Фиксация  материала  продолжалась  не  менее  8—10  дней.  При  извлечении  кишки  вырезали  кусочки  площадью  до  1  см²  из  нескольких  отделов  илеоцекальной  области  (так  как  на  эту  зону  слепой  кишки  приходится  наибольшее  антигенное  воздействие)  [2].  После  заливки  в  парафин  приготавливали  гистологические  срезы  толщиной  4—6  мкм,  которые  окрашивали  гематоксилин-эозином  и  по  Ван-Гизону. 

При  изучении  клеточного  состава  лимфоидных  структур  в  стенке  слепой  кишки  использовали  микроскоп  МБИ-6  при  увеличении  15  х  40.  Подсчет  клеток  проводился  с  помощью  окуляр-микрометра  МОВ-1-15х  на  единице  площади  гистологического  среза  в  10  полях  зрения  методом  точечного  счета  по  общепринятым  методикам.  Определяли  абсолютное  (общее  количество  клеток  на  единице  площади  гистологического  среза)  и  относительное  содержание  клеточных  элементов. 

Морфологическое  исследование  проводили  в  подэпителиальной  зоне,  собственной  пластинке  слизистой  оболочки,  между  криптами,  в  складке  и  в  скоплениях  лимфоидных  клеток.  Исследовали  состав  клеток  лимфоидного  ряда  в  центрах  размножения,  в  мантии  лимфоидных  узелков,  в  лимфоидных  узелках  без  центра  размножения  и  в  межузелковой  зоне. 

Полученную  из  хвостовой  вены  кровь  в  количестве  1  мл  помещали  в  пробирки,  содержащие  3,8%  цитрат  натрия  (соотношение  крови  и  цитрата  10:1).  Подсчет  лейкоцитов  осуществляли  в  камере  Горяева.  Подсчет  лейкоцитарной  формулы  проводили  в  окрашенных  мазках  (метод  окрашивания  по  Романовскому),  лейкограмму  выводили  из  расчета  на  200  клеток.  Крысы  под  эфирным  наркозом  методом  декапитации  выводились  из  опыта  на  3,  7,  14,  30  дни  после  облучения.  В  каждой  серии  использовали  по  6  крыс.  В  эксперименте  участвовало  24  животных.  Контролем  служили  6  интактных  крыс  с  вышеуказанными  характеристиками.  Статистическую  обработку  проводили  с  помощью  пакета  лицензионных  программ  Mikrosoft  Offis  Excel,  вычисляя  среднюю  арифметическую  для  всей  группы,  среднеквадратичное  отклонение,  ошибку  средней,  коэффициент  вариации,  отклонение  величины  в  эксперименте  от  величины  в  контроле  в  процентах.  Достоверность  полученных  данных  определяли  на  основании  t-критерия  Стьюдента.

У  контрольной  группы  животных  в  илеоцекальном  отделе  встречаются  лимфоидные  скопления  в  виде  предузелков.  Плотность  клеток  на  единицу  площади  среза  составляет  в  подэпителиальной  зоне  и  лимфоидных  скоплениях,  в  среднем,  48,2±4,12.  Содержание  лимфоцитов  составляет  около  39,64  %,  так  называемых,  молодых  клеток  (бластов  и  больших  лимфоцитов)  —  до  10,37  %.  Клетки  с  картинами  митозов  составляют  до  0,98  %  и  встречаются,  преимущественно,  в  подэпителиальной  зоне.  В  местах  лимфоидных  скоплений  мы  насчитали  до  14,72  %  молодых  форм  клеток.  Содержание  плазматических  клеток,  максимально  выявляемое  между  криптами,  достигает  19,3  %.  Уровень  лейкоцитов  крови  в  контрольной  серии  составляет  10,2±1,4  ×  10⁹.  Формула  напоминает  картину  крови  новорожденного  ребенка  –  преобладают  лимфоциты  до  60—80  %,  нейтрофилы  составляют  не  более  30  %,  при  этом  палочкоядерных  не  более  2  %.  Эозинофилы  составляют  в  контроле  в  среднем  0,1  %,  моноциты  до  4—5  %.

На  3-и  сутки  после  облучения  в  лимфоидных  образованиях  слепой  кишки  преобладают  деструктивные  процессы  в  клетках  —  увеличиваясь  до  4,1  раза  в  сравнении  с  контролем,  плотность  распределения  лимфоидных  клеток  уменьшается  в  2,6  раза.  Происходит  уменьшение  числа  лимфоцитов  (средних  и  малых)  в  2,8  раза,  почти  полностью  исчезают  молодые  формы  клеток  (встречаются  единичные  большие  лимфоциты)  в  лимфоидных  образованиях,  что  расценивается  нами,  как  подавление  лимфоцитопоэза  под  влиянием  облучения.  Отмечается  резкое  снижение  числа  зрелых  антигенпродуцирующих  плазматических  клеток  во  всех  зонах  стенки  слепой  кишки  в  3,2  раза.  Уменьшается  количество  макрофагов  по  сравнению  с  контролем.  Число  гранулоцитов  увеличивается  в  3,5,  а  местами  до  5—8  раз.  Среди  гранулоцитов  преобладает  доля  эозинофилов.  Повышение  количества  эозинофилов  в  стенке  слепой  кишки,  по-видимому,  является  проявлением  развивающихся  воспалительно-деструктивных  процессов  после  воздействия  радиации. 

Количество  лейкоцитов  крови  составляет  1,8±1,4  ×  10⁹,  что  значительно  ниже  нормы.  Облучение  приводит  к  достоверному  и  выраженному  снижению  процентного  числа  лимфоцитов  и  возрастанию  процентного  числа  нейтрофилов.  Лимфоциты  составляют  29,3  %,  нейтрофилы  —  54,9  %,  при  этом  происходит  увеличением  числа  молодых  форм  нейтрофилов,  за  счет  палочкоядерных,  достигающих  13—14  %.  Изменения  со  стороны  эозинофилов  были  менее  выраженными  количественно,  но  в  процентном  соотношении  их  число  увеличивалось  в  несколько  раз.  Отмечается  моноцитопения  —  1,2  %. 

На  7-е  сутки  эксперимента  сохраняется  отсутствие  в  стенке  слепой  кишки  одиночных  лимфоидных  узелков  и  уменьшение  плотности  расположения  клеток  в  лимфоидных  структурах.  По-прежнему,  снижено  содержание  лимфоцитов  (малых  и  средних)  в  2,2  раза.  До  3  раз  усиливаются  деструктивные  процессы  в  клетках  всех  зон  слепой  кишки.  Параллельно  деструкции  в  подэпителиальной  зоне  усиливается  макрофагеальная  реакция  (в  2,59  раза).  Увеличено  содержание  макрофагов.  Количество  молодых  форм  клеток  снижается,  вплоть  до  полного  их  исчезновения,  что  можно  объяснить  как  снижением  бласттрансформации  клеток,  так  и  ограничением  их  поступления  в  орган.  Клетки  с  митозами  отсутствуют.  Воздействие  облучения  приводит  к  подавлению  плазматической  реакции.  Содержание  плазматических  клеток  уменьшается  в  2,1  раза  относительно  контроля.  Количество  гранулоцитов  относительно  увеличено. 

Лейкопения  в  крови  представлена  более  высоким,  чем  на  3-и  сутки,  показателем  —  2,5±1,4  ×  10⁹.  Лимфоциты  составляют  42,1  %,  нейтрофилы  —  44,7  %,  палочкоядерные  —  до  14  %.  Моноцитопения  достигла  0,8  %,  эозинофилы  сохраняли  10-кратное  увеличение.

В  следующий  срок  эксперимента  (14  суток),  несколько  увеличивается  плотность  расположения  клеток  в  лимфоидных  образованиях  слепой  кишки,  но  по  сравнению  с  контролем,  она  снижена  в  2  раза.  Содержание  деструктивно  измененных  и  разрушенных  клеток  в  сравнении  с  предыдущим  сроком  несколько  уменьшается  на  5,2  %.  Одновременно  в  лимфоидных  образованиях  стенки  слепой  кишки  происходит  увеличение  содержания  лимфоцитов  (малых  и  средних)  на  5,5  %.  Сохраняется  уменьшение  числа  лимфоцитов  (средних  и  малых)  в  1,9  раза,  встречаются  единичные  большие  лимфоциты  в  лимфоидной  ткани.  Снижено  число  зрелых  антигенпродуцирующих  плазматических  клеток  в  2,4  раза.  Количество  макрофагов  по  сравнению  с  контролем  несколько  увеличивается,  значительно  превосходя  их  количество  в  начальные  сроки  эксперимента.  Число  гранулоцитов  увеличивается  в  8—10  раз. 

В  крови  усугубляется  лейкопения  —  0,85±1,4  ×  10⁹.  Лимфоциты  составляют  30  %,  нейтрофилы  —  50,5  %,  палочкоядерные  и  незрелые  клетки  составляют  12  %.  Эозинофилы  достигают  максимума,  составляя  1,6  %.  С  14-х  суток  отмечается  моноцитоз  —  9,3  %.

На  30-е  сутки  наблюдения  на  месте  лимфоидных  бляшек  остаются  диффузные  скопления  лимфоидной  ткани  с  участками  уплотнения.  В  этих  лимфоидных  образованиях  деструктивные  процессы  превышают  контрольные  показатели  в  4,1  раза.  Общее  количество  клеток  уменьшено  в  2,6  раза.  Одиночных  лимфоидных  узелков  в  стенке  слепой  кишки  не  выявлено.  Содержание  лимфоцитов  (малых  и  средних)  в  ЛТ  в  стенках  слепой  кишки  снижено  в  1,7  раза.  Большие  лимфоциты  единичные,  число  плазматических  клеток  уменьшено  в  2,0  раза.  Количество  макрофагов  по  сравнению  с  контролем  продолжает  увеличиваться.  Число  гранулоцитов  увеличено  в  6  раз. 

Лейкопения  на  30-е  сутки  составляет  2,4±1,4  ×  10⁹.  Лимфоциты  составляют  33  %,  нейтрофилы  —  43,0  %.  Палочкоядерные  формы  составляют  14  %.  Эозинофилы  составляют  —  1,2  %.  Сохраняется  моноцитоз  —  10,8  %.

Таким  образом,  облучение  приводит  к  значительным  структурным  изменениям  лимфоидных  образований  слепой  кишки.  Происходит  уменьшение  плотности  расположения  клеток  лимфоидной  ткани  в  собственной  пластинке  слизистой  оболочки,  исчезают  лимфоидные  узелки.  Повышается  содержание  деструктивно-измененных  клеток,  уменьшается  количество  малых  лимфоцитов,  подавляется  пролиферация,  снижаются  процессы  созревания  и  дифференцировки  лимфоцитов  в  антителпродуцирующие  плазматические  клетки.  Отмечаемые  лимфопения  и  нейтрофилез  свидетельствуют  о  том,  что  облучение  является  мощным  стресс-фактором.  Отсутствие  нормализации  показателей  крови  и  лимфоидных  структур  слепой  кишки  свидетельствует  о  выраженных  нарушениях  в  системе  иммунитета,  что  может  иметь  отрицательные  последствия  для  организма.

Список  литературы:

1. Аминова  Г.Г.  Цитоархитектоника  лимфоидной  ткани,  ассоциированной  со  стенкой  слепой  кишки  у  человека  в  подростковом  возрасте  //  Морфология.  —  2002.  —  №  4.  —  С.  53—55.
2. Бородин  Ю.И.  Регионарный  лимфатический  дренаж  и  лимфодетоксикация.  //  Морфология.  —  2005.  —  128,  —  №  4  —  С.  25—28.
3. Ганиева  А.И.,  Григоренко  Д.Е.,  Гусейнов  Т.С.  Лимфоидная  ткань  в  стенках  слепой  кишки  крыс  //  Вестник  новых  медицинских  технологий.  —  2009.  —  №  1.  —  С.  176—177.
4. Гусейнова  С.Т.,  Гусейнов  Т.С.  Анатомия  структур  слизистой  оболочки  тонкой  кишки  белых  крыс  //  Современные  наукоёмкие  технологии.  —  2010.  —  №  8.  —  С.  140.
5. Ковешников  В.Г.,  Берест  А.Ю.  Влияние  хронического  воздействия  ионизирующего  излучения  и  глутамата  натрия  на  морфогенез  тимуса  в  эксперименте  //  Український  медичний  альманах.  —  2012.  —  Т.  15,  —  №  5.  —  С.  91—93.
6. Кораблёва  Т.Р.  Особенности  структурной  организации  лимфоидных  бляшек  тощей  кишки  телят  //  Науч.  труды  Южного  филиала  «Крымский  агротехнол.  Ун-т»  Симферополь.  —  2006.  —  Вып.  98.  —  С.  95—99.
7. Кривенцов  М.А.  Количественные  изменения  периферической  крови  крыс  после  облучения  /  М.А.  Кривенцов,  Е.Ю.  Бессалова,  Н.В.  Девятова,  В.Н.  Куница,  В.П.  Воюцкий,  В.В.  Куница,  О.И.  Грязнова  //  «Зб.  наук.  праць  V  Всеукраїнської  наук.-практ.  конф.  молодих  учених  і  студентів».  3—4  березня.  2014.  м.  Житомир.  —  С.  343—346.
8. Мадиева  М.Р.,  Мусайнова  А.К.,  Жетписбаев  Б.А.,  Узбекова  С.Е.,  Жетписбаева  Х.С.  Изменения  состояний  лимфоидных  органов  иммуногенеза  в  позднем  периоде  после  действия  фракционированной  дозы  гамма-излучения  //  Science  &  Health  Care.  —  2014.  —  Vol.  2.  —  P.  31—37.
9. Мусайнова  А.К.  Состояние  периферических  органов  иммуногенеза  в  ближайшем  и  отделенном  периодах  после  действия  различной  дозы  гамма-излучения  //  Астана  медициналыķ  журналы.  —  2014.  —  №  3.  —  С.  69—73. 
10. Петренко  В.М.  Форма  и  топография  ободочной  кишки  у  белой  крысы  //  Успехи  современного  естествознания.  —  2011.  —  №  12.  —  С.  17—21. 
11. Сапин  М.Р.,  Этинген  Л.Е.  Иммунная  система  человека.//  М.:  Медицина.  1996.  —  301  с.
12. Mebius  R.E.  Organogenesis  of  Lymphoid  Tissues  //  Natural  Reviews  Immunology.  —  2003.  —  Vol.  3.  —  P.  292—303.