МАКРОФАГИ ВТОРИЧНЫХ ИНКАПСИЛИРОВАННЫХ ОРГАНОВ ИММУННОГЕНЕЗА У КЛИНИЧЕСКИ ЗДОРОВЫХ СОБАК

MACROPHAGES IN THE SECONDARY INCAPSULATED IMMUNE ORGANS IN CLINICALLY HEALTHY DOGS

Suynali Shatmanov

doc. of Med. Sciences, Acting Professor of Osh State University,

Kyrgyzstan, Osh

Tashbolot Erkebaev

cand. of Biol. Sciences, Acting Assistant Professor of Osh State University,

Kyrgyzstan, Osh

Nurbek Aldaiarov

cand. of Vet. Sciences, Assistant Professor of Kyrgyz-Turkish Manas University,

Kyrgyzstan, Bishkek

АННОТАЦИЯ

Статья посвящена изучению распространения и место локализации MAC387 позитивных клеток в селезенке и лимфатическом узле у клинически здоровых собак. Макрофаги в красной пульпе селезенки распределены равномерно, а в маргинальной зоне они образуют толстую непрерывно-кольцеобразную структуру. Более компактное скопление макрофагов в лимфатическом узле наблюдается вдоль синусов коркового вещества и в мозговом веществе. В Т- и В-зонах обеих органов макрофаги находятся в малом количестве.

ABSTRACT

The paper studies the distribution and localization of the MAC387 positive cells in the spleen and lymph node in clinically healthy dogs. In the red pulp of the spleen macrophages evenly distributed, in the marginal zone they form a thick and continuous-annular structure. More compact aggregation of macrophages in lymph node is observed along sinuses of cortex and in medulla. In T- and B-lymphocytes areas of both organs macrophages are in few amounts.

Ключевые слова: макрофаги; иммуногистохимия (ИГХ); селезенка и лимфатические узлы; собака.

Keywords: macrophages; immunohistochemistry; spleen and lymph nodes; the dog.

Введение. Клетки системы мононуклеарных фагоцитов являются ключевыми эффекторными клетками врожденного иммунитета, а также как антиген-презентующие клетки, участвуют в формировании адаптивного иммунитета. В процессе эндоцитоза они секретируют ряд растворимых продуктов различной активности, которые проявляют воспалительные свойства и микробоцидное действие, характеризуются как хемоаттрактанты, обладают ранозаживляющими свойствами и способствуют межклеточным взаимодействиям [1, с. 183]. Не зависимо от их локализаций, все клетки этой системы имеют миелоидное происхождение и выполняют одинаковые функции.

И.И. Мечников впервые дал четкое описание макрофагам и его работы оказали глубокое влияние на развитие патологии и иммунологии [2, с. 9]. В современности, MAC387 и Lysozyme являются основными маркерами ИГХ при выявлении клеток системы мононуклеарных фагоцитов. Вышеизложенными маркерами были изучены клетки Купфера печени в пренатальном и постнатальном развитии человека [3; 4]. Купферовские клетки составляют около 80 % от всех макрофагов тела, а в самой печени их количество около 15 % от всех клеток органа [1, с. 89]. Макрофаги, вместе с лимфоцитами, являются резидентными клетками эндометрия, и они в количественном отношении изменяются при разных фазах полового цикла у собак [8, с. 740]. Указано, что макрофагальная реакция в паракортикальной зоне лимфатического узла осла при острой инфекции вирусом иммунодефицита обезьян играет важную роль при стимуляции неактивных Т-лимфоцитов [7, с. 977]. Тканевые пробы коров, фиксированные в формол бихромате, дали хорошую положительную реакцию маркеру иммуногистохимии MAC387, по сравнению тканевыми пробами зафиксированные в 10 %-ном водном растворе нейтрального формалина [5, с. 321]. MAC387 не имеет большого значения в дифференциальной диагностике опухолей мягких тканей, и не является специфическим маркером гистиоцитов 6, с. 251]. Научные работы, связанные с маркером MAC387 многочисленны, но нами доступной литературе, локализация макрофагов в пульпе селезенки и в паренхиме лимфатического узла в норме у собак отсутствуют.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы является изучение место локализации MAC387 позитивных клеток у клинически здоровых собак. В соответствии целью перед нами поставлены нижеследующие задачи: гистологическими и ИГХ методами исследования изучить место локализации и распространение макрофагов в пульпе селезенки и паренхиме лимфатического узла.

Объекты и методы исследования. Данная работа выполнялась в Кыргызском национальном аграрном университете им. К.И. Скрябина и Институте ветеринарной патологии Цюрихского университета (Швейцария, 2007-08). Тканевые пробы от селезенки и лимфатических узлов были получены от 3 клинически здоровых собак и зафиксированы в 10 %-ном водном растворе нейтрального формалина. Обработка тканевых проб проведена согласно общепринятой процедуре гистологической техники. Серийные срезы готовились на полуавтоматическом микротоме новой модификаций толщиной 2–4 мкм.

Для общего обзора гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Восстановление антигена для ИГХ производили с помощью автоклава Паскаль (20 минут, +98⁰ С) при использовании антиген восстанавливающего буферного раствора рH 6.0 (цитратный буфер) в соответствии с инструкцией производителя. Был использован SABC (Streptavidin and Biotinylated horseradish peroxidase macro-molecular Complex) метод ИГХ. Для выявления макрофагов использовали антитело Monoclonal Mouse Anti-Human Myeloid/Histiocyte Antigen, Clon MAC387. Окрашивание производили вручную в специальной влажной камере. Срезы дополнительно окрашены гематоксилином Майера.

Результаты исследования. Как известно, селезенка является самым крупным вторичным инкапсулированным органом иммунной системы. В структурном отношении орган состоит из стромы (капсула и трабекулы) и пульпы (красная и белая) (рис. А). Красная пульпа органа, составляя 80 % от общей площади пульпы, депонирует зрелые кровяные клетки, осуществляет контроль над состоянием эритроцитов и кровяных пластинок, фагоцитирует инородных частиц, обеспечивает дифференцировку лимфоцитов и превращение моноцитов в макрофаги, а также участвует в образовании желчи и эритроцитов. Основная роль в этом отведена селезеночным макрофагам. Они отличаются от других клеток крупными размерами и бобовидными или подковообразными ядрами. Часто в их цитоплазме обнаруживаются инородные частицы или темно-желтый пигмент гемосидерин. ИГХ MAC387 позитивные клетки в красной пульпе расссеяны повсеместно в виде одиночных клеток или их мелкими группами (рис. Б). В строме органа они не встречаются, за исключением единичных случаев, где одиночные макрофаги локализованы в толще капсулы и трабекул.

Белая пульпа составляя 20 % общего объема органа, образована лимфоидными фолликулами разного морфофункционального состояния, периартериальной муфтой и маргинальной зоной, отграничивающий красную и белую пульпы, и фильтрирует периферическую кровь от антигенов разного генеза. В белой пульпе макрофаги встречаются в герминативном центре вторичного лимфофолликула, среди клеток первичного лимфофолликула и Т-зоны, но их незначительны. Массовое скопление MAC387 положительных клеток наблюдается в маргинальной зоне белой пульпы. Они полностью окружают Т- и В-зону белой пульпы в виде толстого непрерывного кольца (рис. 1 Б), местами скапливаясь плотно или рыхло, в зависимости от антигенного воздействия определенного участка.

Рисунок. Парафиновый срез селезенки и лимфатического узла клинически здоровой собаки. А – общая микрокартина белой и красной пульпы органа. Окраска гематоксилином и эозином. х62,5; Б – распространение МАС387 позитивных клеток в пульпе органа. Monoclonal Mouse Anti-Human Myeloid/Histiocyte Antigen, Clon MAC387. SaBC метод ИГХ; х25; А¹ – общая микрокартина коркового вещества органа. Окраска гематоксилином и эозином. х25; Б¹ – распространение и локализация МАС387 позитивных клеток в паренхиме органа. Monoclonal Mouse Anti-Human Myeloid/Histiocyte Antigen, Clon MAC387. SaBC метод ИГХ. х25

Лимфатический узел микроскопически состоит из стромы, коркового и мозгового веществ. Корковое вещество органа образовано фолликулярной или В-зоной и паракортикальной или Т-зоной клеток (рис. А¹). Макрофаги в фолликулярной зоне встречаются в единичных количествах в герминативном центре лимфофолликула и среди клеток первичного лимфофолликула. В паракортикальной зоне коркового вещества количество макрофагов также незначительны. В корковом веществе органа плотное скопление MAC387 положительных клеток отмечается вдоль синусах, соединяющие капсулярный синус с мозговым веществом. Основная масса макрофагов в виде мелких групп и одиночных клеток наблюдаются в мозговом вещесте лимфатического узла (рис. Б¹).

Выводы. Макрофаги, являясь одним из основных клеток естественного и приобретенного иммунитета, во вторичных инкапсулированных органах иммуногенеза имеют свои определенные места расположения: а) в красной пульпе они распределены равномерно, в маргинальной зоне образуют толстую, непрерывно-кольцеобразную структуру, а в лимфофолликулах и периартериальной муфте единичны; б) более компактное скопление макрофагов наблюдается вдоль синусов коркового вещества и в мозговом веществе, а в фолликулярной и паракортикальной зонах коркового вещества они встречаются в малом количестве.

Список литературы:

1. Манько В.М., Девришев Д.А. Ветеринарная иммунология. Фундаментальные основы // – М.: Издательство «Агровет», 2011. – С. 89; 183.
2. Ян Карр. Макрофаги // – М.: «Медицина», 1978. – С. 9.
3. Bardadin K.A., Scheuer P.J., Peczek A., Wejman J. Immunocytochemical observations on macrophage populations in normal fetal and adult human liver / J Pathol. – 1991. – Jul; 164 (3). – Р. 253–259.
4. Cope E.M.W., Dilly S.A. Kupffer cell number during human development / Clin. Exp. Immunol. – 1990. 81, – Р. 485–488.
5. Gutierrez M., Forster F.I., McConnell S.A., Cassidy J.P., Pollock J.M., Bryson D.G. The detection of CD2+, CD4+, CD8+, and WC1+ T lymphocytes, B cells and macrophages in fixed and paraffin embedded bovine tissue using a range of antigen recovery and signal amplification techniques / Vet Immunol Immunopathol. – 1999. – № 30; 71 (3-4). – Р. 321–34.
6. Loftus B., Loh L.C., Curran B., Henry K., Leader M. Mac387: its non-specificity as a tumour marker or marker of histiocytes / Histopathology. – 1991. – Sep; 19 (3). – Р. 251–255.
7. Otani I., Mori K., Sata T., Terao K., Doi K., Akari H., Yoshikawa Y. Accumulation of MAC387+ macrophages in paracortical areas of lymph nodes in rhesus monkeys acutely infected with simian immunodeficiency virus / Microbes Infect. – 1999. – Oct; 1 (12). – Р. 977–85.
8. Pires M.A., Payan-Carreira R. Resident Macrophages and Lymphocytes in the Canine Endometrium / Reprod. Domest. Anim. – 2015. – Oct; 50 (5). – Р. 740–9.