СРАВНЕНИЕ  МЕТОДОВ  EVELYN -MALLOY  И  М.С.  КУШАКОВСКОГО  В  ОПРЕДЕЛЕНИИ  УРОВНЯ  МЕТГЕМОГЛОБИНА  В  КРОВИ

Фаткуллин  Ким  Вилевич

аспирант  кафедры  клинической  лабораторной  диагностики  ИДПО  Башкирского  Государственного  Медицинского  Университета,  РФ,  г.  Уфа

Ряховский  Андрей  Евгеньевич

аспирант  кафедры  патологической  физиологии  Башкирского  Государственного  Медицинского  Университета,  РФ,  г.  Уфа

Е-mail :  dr.ryahov@yandex.ru

Еникеев  Дамир  Ахметович

д-р  мед.  наук  профессор  зав.  Кафедрой  патологической  физиологии  Башкирского  Государственного  Медицинского  Университета,  РФ,  г.  Уфа

Байков  Денис  Энверович

д-р  мед.  наук  профессор  кафедры  общей  хирургии  с  курсом  лучевой  диагностики  ИПО  Башкирского  Государственного  Медицинского  Университета,  РФ,  г.  Уфа

Саляхова  Резеда  Мазгутовна

канд.  мед.  наук,  доцент  кафедры  лабораторной  диагностики  ИДПО  Башкирского  Государственного  Медицинского  Университета,  РФ,  г.  Уфа

Актуальность:   Одним  из  основных  физиологических  процессов,  протекающих  в  организме,  является  дыхание.  При  этом  основную  роль  в  транспорте  кислорода  исполняет  входящий  в  состав  эритроцитов  гемоглобин.  В  организме  человека  помимо  функциональных  производных  гемоглобина,  также  присутствуют  и  его  нефункциональные  формы  —  дисгемоглобины,  которые  неспособны  участвовать  в  переносе  кислорода  к  клеткам.  Одним  из  наиболее  клинически  значимых  дисгемогбинов  считается  метгемоглобин  (MetHb  или  Hi)  —  продукт  окисления  Fe²⁺  в  составе  гема  до  Fe³⁺,  при  этом  железо  теряет  способность  связывать  и  транспортировать  кислород  [4]. 

В  организме  человека  постоянно  появляются  возможности  для  эндогенного  окисления  железа  гема  c  образованием  Hi;  основной  причиной  окисления  является  сам  кислород.  Накопления  метгемоглобина  в  организме  обычно  не  происходит  благодаря  работе  специальных  систем,  главным  компонентом  которых  является  цитохром  b5-редуктаза  (НАД×Н-метгемоглобинредуктаза)  —  на  ее  долю  приходится  около  70%  восстановленного  гемоглобина,  а  также  аскорбиновая  кислота  (12—16  %)  и  глутатион  (9—12  %).  Еще  один  путь  восстановления  Hi  связан  с  ферментом  НАДФ×Н-метгемоглобинредуктазой  —  на  его  долю  5—6  %  восстановленного  гемоглобина  [1].

При  абсолютной  или  относительной  недостаточности  восстанавливающих  систем  в  эритроцитах  развиваются  метгемоглобинемии,  при  которых  содержание  Hi  в  крови  превышает  физиологическую  норму  (1—2  %  от  общего  количества  Hb).  Выделяют  первичные  (наследственные)  метгемоглобинемии,  связанные  с  недостатком  ферментов  восстановления  Hi  либо  с  присутствием  аномальных  гемоглобинов,  а  также  вторичные  (приобретенные,  токсические)  метгемоглобинемии  экзогенного  и  эндогенного  происхождения.  Увеличение  уровня  Hi  в  крови  при  этих  состояниях  приводит  к  нарушению  оксигенации  крови  и  тканей  с  развитием  гипоксии  и,  как  правило,  цианоза.

Токсические  метгемоглобинемии  экзогенного  происхождения  развиваются  при  воздействии  химических  факторов  и  некоторых  лекарственных  средств.  Основными  метгемоглобинобразователями  являются  нитросоединения,  аминосоединения,  окислители,  некоторые  красители  (метиленовая  синь);  лекарственные  вещества  и  др.  [2].  Попав  в  организм,  эти  соединения  непосредственно  окисляют  Fe²⁺  в  составе  гемоглобина,  либо  метаболизируются  с  образованием  продуктов,  которые  обладают  этим  свойством. 

Актуальность  проблемы  хроническим  отравлением  метгемоглобинобразователями  нашла  отражение  в  приказе  Минздравсоцразвития  России  №  302н  от  12  апреля  2011  г.  «Об  утверждении  перечней  вредных  и  (или)  опасных  производственных  факторов  и  работ,  при  выполнении  которых  проводятся  обязательные  предварительные  и  периодические  медицинские  осмотры  (обследования),  и  порядка  проведения  обязательных  предварительных  и  периодических  медицинских  осмотров  (обследований)  работников,  занятых  на  тяжелых  работах  и  на  работах  с  вредными  и  (или)  опасными  условиями  труда»  [3].  На  основании  этого  приказа,  определение  метгемоглобина  стало  обязательным  исследованием  при  проведении  обследования  работников,  имеющих  контакт  на  рабочем  месте  с  метгемглобинобразующими  агентами.  Вместе  с  тем,  предлагаемые  методы  исследования  метгемоглобина  (наиболее  распространенный  метод  М.С.  Кушаковского  и  классический  метод  Evelyn-Malloy)  имеют  определенные  различия,  требующие  детального  анализа.

Цель:   Провести  сравнительный  анализ  измерения  образцов  крови  с  различным  уровнем  метгемоглобина,  используя  два  различных  метода  его  количественного  определения.

Материалы  и  методы:   Ввиду  ограниченной  доступности  контрольных  материалов  на  основе  гемоглобина,  были  использованы  экспериментально  полученные  образцы  крови  с  различным  уровнем  метгемоглобина.  Для  этого  использовались  44  пробы  свежеполученной  венозной  крови,  взятой  у  добровольцев  в  вакуумные  «гепариновые»  пробирки,  с  последующим  внесением  метгемоглобинобразующего  агента  (нитрит  натрия,  феррицианид  калия).  При  моделировании  MetHb-содержащего  биоматериала  выявилось,  что  нитрит  натрия  вызывает  метгемоглобинобразование  при  добавлении  к  цельной  крови,  проникая  в  неповрежденные  эритроциты,  в  то  время  как  феррицианид,  по-видимому,  неспособен  быстро  проходить  через  мембрану  клеток,  и  может  действовать  исключительно  на  гемолизат.  С  учетом  этого  MetHb-содержащие  образцы  получались  путем  добавления  5—20  мкл  4  %  раствора  нитрита  натрия  к  3  мл  цельной  крови  с  нормальным  уровнем  Hb,  либо  5—50  мкл  10  %  раствора  феррицианида  калия  к  гемолизату,  полученному  смешиванием  3  мл  крови  с  10  мг  сухого  дезоксихолата  натрия.  В  дальнейшем  в  каждом  из  образцов  определялся  уровень  метгемоглобина  на  спектрофотометре  UNICO  2605  двумя  методами  —  методом  Evelyn-Malloy  [5]  и  методом  М.С.  Кушаковского  [2].

Результаты:   Результаты  сравнительных  измерений  отображены  на  рисунке  №  1.  При  применении  обоих  методов  были  получены  близкие  результаты  (r>0,997),  в  то  же  время,  значения,  полученные  при  измерении  образцов  с  высоким  уровнем  MetHb  (>  20%),  c  использованием  метода  М.С.  Кушаковского,  были  несколько  ниже  уровня  MetHb,  определенного  методом  Evelyn-Malloy  (в  среднем  разница  составила  10,5  %,  максимальная  разница  —  24,1  %).  Данное  различие  обусловлено,  вероятно,  несоответствием  коэффициентов  молярной  экстинкции  мет-  и  цианметгемоглобина,  определенных  и  использованных  М.С.  Кушаковским,  и  аналогичными  данными  нашего  спектрофотометра.  При  этом  необходимо  отметить,  что  обнаруженное  несоответствие  не  оказывает  значительного  влияния  на  клиническое  значение,  клиники  отравления  при  уровне  MetHb  30—33  %  или  даже  при  уровне  40—45  %  будут  практически  одинаковы.

Рисунок  1.  Результаты  сравнительных  измерений  MetHb

Вывод:   Клинически  значимые  сдвиги  уровня  карбокси-  и  метгемоглобина  могут  с  достаточной  точностью  быть  определены  обоими  методами.  В  то  же  время,  применение  метода  М.С.  Кушаковского  может  приводить  к  получению  результатов,  отличающихся  от  аналогичных,  при  использовании  классического  метода  Evelyn-Malloy.

Список  литературы:

1.Герман  С.В.  Метгемоглобинемии:  особенности  патогенеза  и  клиники  //  Клиническая  медицина.  —  1999.  —  Т.  77,  —  №  4.  —  С.  9—12.

2.Кушаковский  М.С.  Клинические  формы  повреждения  гемоглобина  (этиология,  патогенез,  спектрофотометрические  и  биохимические  методы  исследования,  диагностика,  лечение).  Л.:  Медицина,  1968.  —  С.  49—54.

3.Приказ  Минздравсоцразвития  России  №  302н  от  12  апреля  2011  г.  «Об  утверждении  перечней  вредных  и  (или)  опасных  производственных  факторов  и  работ,  при  выполнении  которых  проводятся  обязательные  предварительные  и  периодические  медицинские  осмотры  (обследования),  и  Порядка  проведения  обязательных  предварительных  и  периодических  медицинских  осмотров  (обследований)  работников,  занятых  на  тяжелых  работах  и  на  работах  с  вредными  и  (или)  опасными  условиями  труда.»,  М.

4.Торшин  В.А.  Клинически  значимые  дисгемоглобины.  Карбоксигемоглобин  //  Лаборатория.  —  2007.  —  №  1.  —  C.  17—18.

5.Evelyn  K.A.,  and  Malloy  H.T.  Microdetermination  of  oxyhemoglobin,  methemoglobin,  and  sulfhemoglobin  in  a  single  sample  of  blood  /J.  Biol.  Chem.1938,  126,  —  Pp.  655—662.