СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ ГИНСЕНОЗИДОВ В ФИТОПРЕПАРАТАХ НА ОСНОВЕ PANAX GINSENG

Женьшень обыкновенный является знаменитым лекарственным растением. Фармакологическое действие лекарственных препаратов на основе женьшеня связывают с наличием в нём специфических активных химических соединений – гликозидов тетрациклических терпенов даммаранового ряда – гинсенозидов (панаксозидов) [3, с. 133; 5, c. 35-36; 6].

В настоящее время настойка женьшеня и другие препараты из его корня включены в Фармакопеи многих стран и широко применяются в качестве адаптогенных средств [7, c. 587-605] при физическом и умственном переутомлении, неврастении, при истощающих заболеваниях, ослаблении половой активности. Корни женьшеня издавна используются в народной медицине в странах Дальнего Востока, в Корее также применяют листья для ускоренной регенерации кожных покровов [2, c. 19-21; 9, с. 1539].

Биологическую активность и фармакологические характеристики тритерпеновых гликозидов женьшеня настоящего исследовали K. Hostettmann, A. Marston, которые приводили данные об их гемостатическом, антигипертензивном и антигиперхолистеринемическом свойствах [8, с. 268-271].

Несмотря на многочисленные исследования, посвященные химическому составу женьшеня и препаратов на его основе, в Российской Федерации до сих пор производители лекарственных препаратов и биологически активных добавок проводят стандартизацию своих продуктов по сумме экстрактивных веществ, а не по содержанию индивидуальных гинсенозидов, что может приводить к терапевтической неэквивалентности одних и тех же препаратов. Поэтому целью данного исследования было проведение сравнительной оценки количественного содержания гинсенозидов в фитопрепаратах на основе Panax Ginseng различных производителей.

Материалы и методы.

Для исследования были использованы следующие фитопрепараты: женьшеня настойка, изготовленная самостоятельно в лабораторных условиях стандартным методом перколяции по государственной фармакопее из корней женьшеня настоящего, собранных в экологически чистом Ольгинском районе Приморского края; женьшеня настойка (ЗАО «Вифитех», Россия); женьшеня настойка (ОАО «Ивановская фармацевтическая фабрика», Россия); женьшеня настойка (ООО «Тульская фармацевтическая фабрика», Россия); капсулы «Женьшеня настоящего экстракт-ВИС» (Вис ООО, Россия); капсулы «Гербион^R женьшень» (КРКА д.д. Ново место, Словения); таблетки «Женьшень» (ООО «Парафарм», Россия).

В первой серии экспериментов мы проводили количественное определение суммы гинсенозидов. Для этого предварительно были приготовлены необходимые растворы:

1). Раствор серной кислоты. К 45 мл воды осторожно, при перемешивании, добавляли 60 мл серной кислоты концентрированной.

2). Раствор СО панаксозида Rg₁. Около 0,012 г (точная навеска) СО панаксозида Rg₁ помещали в мерную колбу вместимостью 15 мл, растворяли в небольшом количестве спирта 96 %, доводили объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивали (раствор А СО панаксозида Rg₁).

0,4 мл раствора А СО панаксозида Rg₁ помещали в колбу вместимостью 15 мл, прибавляли 2 мл серной кислоты раствора 70 % и нагревали на водяной бане в течение 10 мин (раствор Б СО панаксозида Rg₁).

2,0 мл раствора Б испытуемого раствора помещали в колбу вместимостью 15 мл, прибавляли 10 мл серной кислоты раствора 70 % и нагревали на водяной бане в течение 10 мин (раствор В испытуемого раствора). После охлаждения измеряли оптическую плотность раствора В испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 526 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали спирт 96 %. Параллельно определяли оптическую плотность раствора Б СО панаксозида Rg₁ в тех же условиях.

В результате спектрофотометрирования градуировочных растворов стандартного образца гинсенозида Rg1 с концентрациями от 0,0052 до 0,0833 был построен калибровочный график (рис. 1). Уравнение калибровочной кривой имело вид  с коэффициентом аппроксимации .

Рисунок 1. Калибровочная кривая гинсенозида Rg1

Для количественного определения суммы гинсенозидов в фитопрепаратах  проводилась экстракция гинсенозидов 70% спиртом из твердых и жидких лекарственных форм на ультразвуковой бане в течение двух часов. Затем полученные экстракты (растворы А) анализировались по вышеописанной методике.

Во второй серии экспериментов проводили количественное определение индивидуальных гинсенозидов в фитопрепаратах методом высокоэффективной хроматографии на колонке Shim-pack VP-ODS, size: 4,6 mm i.d. х 250 mm, Shimadzu с предколонкой Shim-pack GVP-ODS 10L x 4.6, Shimadzu [4, стр.] при следующих условиях: подвижная фаза: ультраочищенная вода – ацетонитрил 90:10 % по объёму с 0 до 20 минуты; 75:25 % по объёму с 20 до 60 минуты и 40:60 % по объёму с 60 минуты; скорость подачи элюента: 1,0 мл/мин; УФ ƛ=203 нм; объём пробы – 10 мкл.

Предварительно были приготовлены и проэлюированы растворы стандартных образцов гинсенозидов Re, Rf, Rb2, Rb1 с концентрациями от 0,25 г/л до 3 г/л. По полученным хроматограммам были построены калибровочные кривые для четырех гинсенозидов. Уравнения которых имели вид:  (Re),  (Rf),  (Rb2),  (Rb1).

Пробоподготовка препаратов женьшеня проводилась методом экстракции суммы гинсенозидов 70%-ным этиловым спиртом в течение двух часов на ультразвуковой бане, полученные экстракты профильтровали через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм. Затем полученные экстракты элюировали не менее 5 раз.

Результаты и обсуждение.

По полученным данным для всех исследованных препаратов было определено суммарное количество гинсенозидов (табл. 1). Наибольшее процентное содержание гинсенозидов (0,34%) наблюдалось в настойке женьшеня, изготовленной самостоятельно, оно превышало содержание гинсенозидов в других препаратах, в среднем, от 2 до 66 раз.

Для количественного определения гинсенозидов Re, Rf, Rb2, Rb1 были получены хроматограммы всех образцов фитопрепаратов женьшеня (рис. 1-2).

Рисунок 2. Хроматограммы настоек женьшеня различных производителей: а) женьшеня настойка, изготовленная самостоятельно, б) женьшеня настойка (ЗАО «Вифитех», Россия), в) женьшеня настойка (ОАО «Ивановская фармацевтическая фабрика», Россия); г) женьшеня настойка (ООО «Тульская фармацевтическая фабрика», Россия).

Рисунок 3. Хроматограммы твердых лекарственных форм препаратов на основе женьшеня настоящего: а) капсулы «Женьшеня настоящего экстракт-ВИС» (Вис ООО, Россия); б) капсулы «Гербион^R женьшень» (КРКА д.д. Ново место, Словения); в) таблетки «Женьшень» (ООО «Парафарм», Россия).

Результаты количественного определения индивидуальных гинсенозидов Re, Rf, Rb2, Rb1 представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Количественное содержание гинсенозидов в препаратах женьшеня

Как видно из полученных результатов, наибольшее содержание гинсенозида Re (0,11%) было обнаружено в настойке женьшеня, изготовленной в условиях лаборатории, которое превысило содержание этого гинсенозида в других фитопрепаратах от 1,5 до 11 раз. Наибольшее содержание гинсенозидов Rf и Rb2 также обнаружено в настойке, изготовленной самостоятельно (0,017% и 0,038%), что превышало данные показатели других препаратов, в среднем, от двух до пяти раз. Концентрация гинсенозида Rb1 оказалась наибольшей в настойке женьшеня ЗАО «Вифитех» (0,14%), она превышала концентрацию  этого гинсенозида в других галеновых препаратах от 1,4 до 38,4 раз, а в сухих лекарственных формах гинсенозида Rb1 не обнаружено.

Выводы

Настойка, полученная в условиях лаборатории из корня женьшеня, выращенного в Ольгинском районе Приморского края, в среднем, в 1,5 раза превосходит по содержанию гинсенозидов остальные анализируемые галеновые препараты и в десятки раз по сумме гинсенозидов в твердых лекарственных формах препаратов женьшеня. Такое различие в количественном содержании действующих веществ, прежде всего, свидетельствует о высоком качестве используемого сырья для изготовления экспериментальной настойки - дикорастущего корня Panax Ginseng. А также о том, что отсутствие в нормативной документации требований по количественному содержанию гинсенозидов позволяет производителям лекарственных препаратов и биологически активных добавок изменять условия своих технологических процессов с целью снижения технологических и экономических затрат и для увеличения технологического выхода готовых продуктов.

Список литературы:

1. Кутай В.Е. Разработка метода количественного определения Re, Rf, Rb₂ гинсенозидов в фитопрепаратах на основе женьшеня // Медицина: актуальные вопросы и тенденции развития: Материалы VIII Международной научно-практической конференции. 2 июня 2016 г.: Сборник научных трудов. – Краснодар, 2016. [электронный ресурс] – Режим доступа. - URL: http://www.apriori-nauka.ru/electronic-arc/Medicina-aktualnye-voprosy-i-tendencii-razvitija/list/70(дата обращения 10.06.2016 г.)
2. Ляпустин С.Н., Фоменко П.В., ред. Дьяков В.И. Женьшень: краткий справочник для сотрудников таможенных органов. М.: Владивостокский филиал Российской таможенной академии, 2009.-52 с.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. М.: Новая волна, 2012.-1216 с.
4. Минздрав России. Государственная фармакопея РФ XIII. Т.3, ФС.2.5.0013.15, 2015.-1294с. [электронный ресурс] - Режим доступа. – URL: http://feml.scsml.rssi.ru/feml(дата обращения 10.06.2016 г.)
5. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: руководство для врачей. М.: Медицинское информационное агентство, 2000.-976 с.
6. European  Scientific  Cooperative  on  Phytoterapy. Ginseng //  Exeter.- 2003.-Volume 2. [электронный ресурс] - Режим доступа. – URL: http://www.koop-phyto.org/en/medicinal-plants/ginseng.php(дата обращения 10.06.2016 г.)
7. Francis  G.,  Kerem  Z.,  Makkar  H.P.S.,  Becker  H.  The biological action of saponins in animal systems: a review// British Journal of Nutrition.-2002.-Volume 88.- N 6. [электронный ресурс] - Режим доступа. – URL: https://ru.scribd.com/doc/63143030/The-Biological-Action-of-Saponins-in-Animal-Systems(дата обращения 10.062016 г.)
8. Hostettmann K., Marston A. Saponins. Chemistry and pharmacology of natural products. Published in the United States of America by Cambridge University Press, New York, 2005.-564 с.
9. Kiefer D., Pantuso T. Panax Ginseng// Am. Family Phys.-2003.-68.-N 8. [электронный ресурс] - Режим доступа. – URL: http://www.aafp.org/afp/2003/1015/p1539.html(дата обращения 10.062016 г.)