СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПИРИДОКСИНА С Fе (III) В ПРИСУТСТВИИ ОРГАНИЧЕСКОГО РЕАГЕНТА

За последние годы арсенал лекарственных средств пополнился новыми препаратами. Современного потребителя занимает вопрос правильности выбора этих лекарственных препаратов, поскольку появилось много фальсифицированных. Качество лекарственного препарата определяется установле­нием его подлинности, определением его чистоты и количественным содержанием чистого вещества в препарате [1, c.330].

Так, для определения пиридоксина использовали железо (III), в качестве органического реагента нами был выбран феноловый красный (ФК), как подходящий реагент для цветной реакции с железом (III) с образованием окрашенного комплекса желто-оранжевого цвета. В работе использовали растворы соли железа концентрацией 1·10^-2 моль/л (Fe₂(SO₄)₃ · 9 Н₂О), фенолового красного (ФК) с концентрацией 1·10^-2 моль/л, приготовленные по точной навеске. Раствор пиридоксина (витамин B₆) с исходной концентрацией 1·10^-2 моль/л получали разбавлением лекарственного препарата для инъекций. Рабочие растворы получали соответствующем разбавлением исходного раствора.

Буферные растворы представляли собой смесь уксусной кислоты СН₃СООН (0,1 М) и гидроксида аммония NH₄ОН (0,1 М) в определенных объемных соотношениях.

Для количественного определения лекарственного препарата использовали спектрофотометрический метод, как наиболее доступный в лабораторных условиях. Метод основан на измерении светопоглощения окрашенных комплексов с различными реагентами.

Для выяснения условий комплексообразования необходимо было исследовать влияние последовательности добавления реактивов и рН среды. При исследовании реакции образования комплексного соединения железа (III) с пиридоксином и феноловым красным в водном растворе было выяснено, что оптимальной средой для комплексообразования явилась щелочная среда (рН = 10). В этих условиях органический реагент (феноловый красный) имеет красную окраску.

Выбранное значение рН является оптимальным для реакции комплексообразования Fe(III) – пиридоксин–феноловый красный, таккакхарактеризуется наибольшей стабильностью и насыщенностью окраски.

В ходе исследования влияния последовательности добавления реагентов было установлено, что порядок смешивания растворов на значения оптической плотности не влияет. Тем не менее, на протяжении всей работы соблюдался следующий порядок смешивания: железо (III) – пиридоксин – феноловый красный – буферный раствор.

В процессе определения устойчивости комплексного соединения визуально было обнаружено, что окраска образуется быстро и устойчива во времени.

Методом изомолярной серии было определено оптимальное соотношение компонентов железо (III)– пиридоксин – ФК в комплексном соединении – 1:1:1. При работе с окрашенными растворами измерение оптической плотности проводили при длине волны 430 нм, т.к. светопоглощение в этой области является максимальным. Это дает возможность провести измерение оптической плотности, ав конечном счете, и количественное определение лекарства с наибольшей точностью и чувствительностью.

По методу Комаря был определен молярный коэффициент погашения ε=12,8×10³, который указывает на то, что определение пиридоксина по реакции комплексообразования с железом (III) и ФК являетсядостаточно чувствительным.

Для выяснения возможности спектрофотометрического определения пиридоксина необходимо установить интервал концентраций пиридоксина, в пределах которого, в системе Fe (III) - пиридоксин- феноловый красный соблюдается закон Бугера - Ламберта - Бера. При определении концентраций лекарственного препарата использовали метод градуировочного графика.

Метод градуировочного графика применяется при многократном спектрофотометрировании однотипных по химическому составу растворов, при выполнении серийных фотометрических анализов. Интервал концентраций стандартных растворов на градуировочной кривой выбирается с учетом охвата области возможных изменений концентраций исследуемого раствора. Оптическая плотность исследуемого раствора должна соответствовать примерно середине градуировочной кривой. В этом интервале концентраций при выбранных толщине кюветы и аналитической длине волны соблюдается основной закон светопоглощения, т.е. график А = f(c) является прямолинейным. Рабочие значения оптической плотности А должны соответствовать интервалу стандартных растворов и обеспечивать значение оптимальных плотностей в интервале А ≈ 0,1 -1,0.

Для построения градуировочного графика готовили несколько разбавленных растворов пиридоксина разной концентрации. Для этого брали последовательно отмеренные объемы исходного раствора пиридоксина в калибровочную пробирку, вместимостью 10 мл, каждый раз добавляя туда определенное количество железа (III) и фенолового красного. Растворы доводили до метки дистиллированной водой, измеряли оптическую плотность при длине волны 430 нм на спектрофотометре в кювете на 0,5 см.

График, построенный в координатах оптическая плотность – концентрация пиридоксина представлен на рис.1.

Рисунок 1. Градуировочный график для определения пиридоксина.

λ = 430 нм, рН = 10.0, l = 0,5 см., ПЭ 5400В.

Как видно из представленного графика закон Бугера - Ламберта - Бера соблюдается в интервале концентраций от 2×10^-5 до 2×10^-4 моль/л. (или 4,11–41,1 мкг/мл).

Уравнение градуировочной прямой для определения пиридоксина имеет вид:

y_i= (0,245 ± 0,00205)x_i+(0,215± 0,0016)

Учитывая экспериментально определенное соотношение железо(III) –пиридоксин – феноловый красный (1:1:1) и литературные данные по способности металла к координации, предполагаемую схему координационного узла можно представить следующим образом:

Рисунок 2. Структура разнолигандного комплекса

Предлагаемая методика достаточно чувствительна и имеет преимущества по простоте и продолжительности и может быть использована для определения пиридоксина.

Список литературы:

1. Березовский В.М. Химия витаминов / В.М.Березовский. – 2-е изд., перераб. – М.: Пищевая промышленность, 1973. – 626 с.
2. Панкратов А.Н., Мустафин А.И. Строение хелатообразующих реагентов сульфофталексонов // Журнал аналитической химии. – 2005. – Т. 60. - №5. – 457 с.