ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА МЫШЕЙ С ЛЕКАРСТВЕННЫМ ДИСБАКТЕРИОЗОМ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ НАПИТКА ЧАЙНОГО ГРИБА

Экспериментальное исследование проведено на 60 мышах линии BALB/c, весом 18-20 грамм, которые были разделены на три группы по 10 особей в каждой. Первая группа – контрольная (интактные мыши). Вторую группу составили животные, у которых моделировали лекарственный дисбактериоз путём ежедневного в течение 5 дней внутрибрюшинного введения раствора гентамицина в концентрации 80 мкг/мл в пересчёте на массу животного [6], начиная с 6 суток вводили по 0,5 мл физиологического раствора. В третью группу входили мыши, которым с целью коррекции интрагастрально вводили напиток чайного гриба (7-ми дневной выработки) в течение семи дней в дозе 0,10 мг/кг в пересчёте на массу животного в течение 7 суток после формирования дисбактериоза. Напиток и физиологический раствор вводились ежедневно в течение 7  дней перорально, через зонд.

У мышей контрольной группы, а также экспериментальных групп после окончания введения гентамицина производили изучение состава микрофлоры толстого кишечника.

Фекалии для исследования микрофлоры толстого кишечника отбирались сразу же после отмены антибиотика и на 2, 5 и 7 сутки после начала введения напитка.

Выращивание бифидобактерий и лактобактерий, выделяемых из состава кишечной микрофлоры, проводили на плотных питательных средах рекомендованного состава [2,4].

Содержание микроорганизмов в 1 грамме материала рассчитывали, исходя из числа выросших колоний микроорганизмов – колониеобразующих единиц (КОЕ) при посеве из максимального разведения, где отмечался рост не менее 10 колоний, учитывая при этом объём посевного материала.

Удельное содержание микроорганизмов вычисляли как количество микроорганизмов, выделенных из биопроб, и выражали в lg КОЕ/г массы биологического материала [2,4].

Полученные данные подвергались математической обработке по общепринятым методам вариационной статистики при помощи программы «Excel».

Изучение характера микрофлоры кишечника экспериментальных животных, с лекарственным дисбактериозом, позволило установить, что применение напитка чайного гриба приводит к изменениям в составе кишечного микробиоценоза. При этом представители (бифидо- и лактобактерии) обнаруживаются в составе микрофлоры кишечника экспериментальных животных, на 2 сутки эксперимента в количестве lg 2,95±0,09 во второй группе и lg 4,73±0,60 в группе с применением напитка чайного гриба, общее  их количество умеренно увеличивается к 7 суткам – бифидобактерий до lg 4,62±0,27 (2 группа) по сравнению с lg 6,99±0,60 (3 группа) при контрольных значениях lg 7,93±0,60, лактобактерий – lg 4,30±0,15 (2 группа) по сравнению с lg 5,65±0,89 при контрольных значениях  lg 6,15±0,77 (Р<0,05) (рисунок 1,2).

Рисунок 1.  Динамика изменения микрофлоры кишечника мышей с  лекарственным дисбактериозом

Рисунок 2. Динамика изменения микрофлоры кишечника мышей с  лекарственным дисбактериозом при применении напитка чайного гриба

Обсемененность фекалий подопытных животных Escherichia coli достоверно снижалась: с lg(7,03±0,12) КОЕ/г до lg(5,49±0,28) КОЕ/г на 7 сутки для второй группы экспериментальных животных и  с lg(6,97±0,91) КОЕ/г до lg(4,51±0,86) КОЕ/г на 7 сутки  в третьей опытной группе с контрольным значением lg(4,17±0,96) КОЕ/г. Аналогичная динамика отмечалась в отношении Streptococcus spp.: с lg(6,17±,156) КОЕ/г  до lg(4,34±0,84) КОЕ/г (7 сутки) — во второй группе и с lg(6,23±0,48) КОЕ/г до lg(3,42±0,93) КОЕ/г (7сутки) — в третьей группе, при контроле  lg(2,93±0,90) КОЕ/г соответственно (Р<0,05) (рисунок 1,2).

В результате экспериментальных исследований, было показано, что напиток чайного гриба способствует незначительному снижению обсемененности содержимого толстого кишечника представителем плесневых грибов Candida spp. с показателями (2,66±0,39) КОЕ/г у второй группы и (2,16±0,17) КОЕ/г на7сутки, при контроле  (1,26±0,32) КОЕ/г.

По данным представленными на рисунке 3 видна зависимость процентного отношения количества выделенных микроорганизмов из фикалий мышей, от контрольных значений. Так, уровень микроорганизмов семейства Bifidobacterium spp. достигает значений 88% на седьмые сутки приема напитка чайного гриба в третьей экспериментальной группе, и 91% содержания Lactobacillus spp., что положительно влияет на восстановление микрофлоры кишечника, так как бифидо- и лактобактерии имеют выраженную антагонистическую активность в отношении патогенных бактерий, регулирующих количественный и качественный состав кишечной микрофлоры в норме, задерживают рост и размножение в нём патогенных и условно-патогенных микробов.

Рисунок 3.  Зависимость изменения микрофлоры кишечника мышей с  лекарственным дисбактериозом при применении напитка чайного гриба в % соотношении от контрольных показателей

Положительным является и тот факт, что у мышей получавших напиток чайного гриба, на седьмые сутки эксперимента оставалось незначительное превышение  Escherichia coli на 8% и Streptococcus spp. на 16% соответственно.  Процент животных, контаминированных плесневыми грибами , уменьшался при использовании напитка чайного гриба в 2, 2 раза (рисунок 3).

Таким образом, применение исследуемого напитка чайного гриба с целью коррекции изменений микробиоценоза толстого кишечника привело к нормализации состава кишечного микробиоценоза, и в то же время оказало положительное влияние на активность антиоксидантной защиты и содержание продуктов перекисного окисления липидов. Это позволяет полагать, что использование данного напитка чайного гриба приводит к повышению адаптивно компенсаторных возможностей макроорганизма при экспериментальном дисбактериозе.

Список литературы:

1. Барановский А.Ю., Кондрашина Э.А. Дисбактериоз кишечника. – СПб.: ПИТЕР, 2007. – 240 с.
2. Каламкарова Л.И., Машкеев А.К., Идрисова Р.С., Багрянцева О.В. Методические указания по диагностике и терапии 2дисбактериоза кишечника. — Алматы: Полиграфсервис, 1999. — 33 с.
3. Кокунин В.А. Статистическая обработка данных при малом числе опытов // Украинский биохимический журнал. — 1975. — № 43, 6. — С. 775–791
4. Печуркин Н.С. Популяционная микробиология. — Новосибирск: Наука, 1978. — 275 с.
5. Фуряева А.В. Исследование конкурентных отношений в хемостате, турбидостате и полунепрерывной культуре // Смешанные проточные культуры микроорганизмов. — Новосибирск: Наука, 1981. — 200 с.