ПРИМЕНЕНИЕ КОНКУРЕНТНОГО ЖИДКОФАЗНОГО ВАРИАНТА ИФА ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ ВИРУСА РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ

Аннотация: разработанную тест-систему на основе жидкофазного конкурентного варианта иммуноферментного анализа  применяли для  изучения антигенной активности вируса РРСС. Показано, что разработанный в ФГБУ «ВНИИЗЖ» может успешно  использоваться  для  контроля инактивированного вакцинного сырья РРСС при производстве вакцинных препаратов.

Введение

Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС) наносит значительный экономический ущерб свиноводству многих стран мира. Вирус, вызывающий у свиней РРСС, классифицирован как Arterivirus suis, относящийся к семейству Arteriviridae. Это мелкий (28,4 нм) оболочечный РНК-содержащий вирус, имеющий сферическую форму. Маркером артеривируса является способность к размножению в культурах клеток эпителия трахеальных колец свиньи. Существует два генотипа вируса: американский (А) и европейский (В), имеющие перекрестные серологические связи и различающиеся биологическими свойствами. Подтверждена циркуляция высоко-, низкопатогенных и апатогенных штаммов вируса РРСС у свиней, что и определяет характер течения болезни. В России впервые клиническое проявление РРСС установлено в 1990 году, а официально заболевание регистрируется с 1993 года (А.Л. Семенихин и др.,1992; В.А. Мищенко и является профилактическая вакцинация животных др.,1994).

Одной из основных мер контроля РРСС в нашей стране моно- и ассоциированными вакцинами. Инактивированные вирусные вакцины обычно готовят из вирулентных вирусов, разрушая вирулентность химическими или физическими методами при сохранении иммуногенности. Такие вакцины должны быть безопасны и содержать большое количество вирусного антигена, чтобы вызвать иммунный ответ и образование антител. В этой связи большое внимание уделяется контролю за качеством вакцин против  РРСС.

Целью работы являлась оценка возможности применения конкурентного жидкофазного варианта иммуноферментного анализа для контроля  определения активности вирусного антигена в культуральном вирусном сырье  для лабораторного анализа качества вакцинного вирусного сырья используемого  в инактивированных вакцинных препаратах.

Материалы и методы

Антиген. В качестве антигена для ИФА использовали очищенный и концентрированный препарат культурального антигена  вируса РРСС,  штамм «КПР-96» («Коллекция штаммов микроорганизмов» ФГБУ «ВНИИЗЖ»), адаптированный к перевиваемой культуре клеток  Мarc-145 с титром инфекционной активности 5,0-7,0 lg ТЦД₅₀/см³.

Коньюгат. Для выявления специфического комплекса использовали коммерческий препарат антител против IgG (H+L) кролика, меченных пероксидазой хрена («Sigma»).

ИФА. Принцип метода заключается в определении степени связывания специфических кроличьих антител с антигеном, которая выражается в виде S/N отношения (отношение оптических плотностей исследуемой сыворотки и контроля ингибиции (безсывороточного контроля). Концентрация образовавшихся комплексов «антиген – кроличье антитело» будет обратно пропорциональна концентрации специфических антител в исследуемой сыворотке. Чем больше концентрация специфических антител в сыворотке, тем ниже значение S/N.

Результаты и обсуждение

При проведении исследований  вирусные пробы, полученные при наработке вакцинного сырья, были распределены  по группам (не инактивированный вирус, инактивированный вирус, вирус инактивированный концентрированный в 5 и 10 раз и надосадок после концентрирования).  Полученные данные исследований вируса РРСС и его антигена представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Результаты жидкофазного варианта ИФА по изучению  инфекционной и антигенной активности вируса РРСС

Анализируя  данные таблицы видно, что  наблюдается корреляция между средними  значениям инфекционных  титров и разведениями в ИФА. Так, например, 5- кратный  концентрат вируса имеет инфекционный титр           6,0+ 0,14 lg ТЦД₅₀/см³ а в ИФА  1:16 - 1:32, у 10- кратного  концентрата инфекционный титр 7,0 + 0,1 а в ИФА  1:32-1:64. В то же время надосадок

с инфекционным титром   2,75+ 0,12ТЦД₅₀/см³  имеет отрицательные значения в ИФА <1:2.

В результате проведенных исследований   показано, что  разработаный чувствительный и специфичный конкурентный  жидкофазный вариант ИФА, может  использоваться в лабораторном контроле для  определения активности вирусного антигена  в вакцинном сырье.

Список литературы:

1. Нго Т.Т., Ленхофф Г. Иммуноферментный анализ. – Москва: Мир, 1988. – 444 с.
2. Bridger J.C., Woode G.N. Neonatal calf diarrhoea: identification of a reovirus-like (rotavirus) agents in faeces by immunofluorescense and immune electron microscopy // British Vet. J. – 1975. – Vol. 131. – P. 528-535.